El Efecto Anrep post-estiramiento del miocardio requiere la transactivación del factor de crecimiento epidérmico

MARÍA C. VILLA-ABRILLE; CLAUDIA I. CALDIZ; IRENE L. ENNIS; MARIELA B. NOLLY; MARÍA J. CASARINI; GLADYS CHIAPPE DE CINGOLANI; HORACIO E. CINGOLANI; NÉSTOR G. PÉREZ

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Argentino de Hipertensión Arterial,; 2010

Sociedad Argentina de Hipertensión Arterial

El efecto Anrep post-estiramiento del miocardio requiere transactivación del receptor del factor de crecimiento epidérmico. Villa-Abrille MC, Caldiz CI, Ennis IL, Nolly MB, Casarini MJ, Chiappe de Cingolani G, Cingolani HE, Pérez NG. Centro de Investigaciones Cardiovasculares, UNLP-CCT-La Plata-Conicet El estiramiento miocárdico produce una respuesta contráctil bifásica: un aumento rápido inicial (mecanismo de Frank-Starling) y uno lento posterior denominado segunda fase de fuerza (SFF) o efecto Anrep. Previamente demostramos que la SFF es la manifestación mecánica de un mecanismo autocrino/paracrino que se inicia con la liberación secuencial de angiotensina II (Ang II) y endotelina (ET) y culmina con la activación del intercambiador Na+/H+ cardíaco (NHE1). Las quinasas más frecuentemente involucradas en la fosforilación y activación del NHE1 son ERK 1/2-p90RSK. Evidencias experimentales muestran que ciertos efectos de Ang II/ET son mediados por transactivación del receptor del factor de crecimiento epidérmico (RFCE), mecanismo que requiere activación de la Src-quinasa y de metaloproteinasas (MMP). Nuestro objetivo fue investigar si la transactivación del RFCE está involucrada en la cascada de señalización que conduce al desarrollo de la SFF. Métodos: Músculos papilares de gato fueron estirados del 92 al 98% de su longitud máxima y se midió fuerza desarrollada, activación de ERK1/2 (con anticuerpos específicos que detectan su forma fosforilada) y se estimó la fosforilación del NHE1 inmunoprecipitandolo y midiendo la Ser703 fosforilada mediante Western blot (anticuerpo especifico anti sitio de unión fosforilado para la proteína 14-3-3). Paralelamente se midió la producción de anión superóxido (O2-) con ET-1 (1 nM) en cortes de ventrículo izquierdo (~1x1x5 mm) mediante quimioluminiscencia con lucigenina. Resultados: La SFF (123±1% de la fase rápida, n=6, P<0.05) fue cancelada al prevenir la transactivación del RFCE inhibiendo la Src-quinasa (PP1, 99±2%, n=4), la MMP (108±3.51%, n=11), el RFCE (AG1478, 98±2%, n=6) y al bloquear al poro de transición mitocondrial (99±3%, n=6). El estiramiento incrementó la fosforilación de ERK1/2 en un 196±17% respecto del control (n=7, P<0.05), efecto que fue cancelado por PP1 (124±22%, n=7) y por AG1478 (131±17%, n=4). La ET-1 aumentó la producción de O2- un 191±17% respecto del control (n=13), efecto que fue abolido por AG1478 (98±15%, n=8) o por PP1 (99±8%, n=3). El factor de crecimiento epidérmico (FCE) incrementó la fosforilación de ERK1/2 (136±8% del control, n=9, P<0.05), efecto que fue cancelado al inhibir la NADPH oxidasa (apocinina, 107±5% n=7), el canal de potasio mitocondrial ATP dependiente (5-HD, 99±4%, n=5 o glibenclamida, 106±8%, n=5) y la cadena respiratoria mitocondrial (rotenona, 103±7%, n=5), sugiriendo que la activación de ERK1/2 es posterior a las generación de especies reactivas del oxígeno por la mitocondria. Finalmente el estiramiento incrementó la fosforilación del NHE1 en Ser703 (172±24% del control, n=4, P<0.05), efecto que fue cancelado por AG1478 (94±17%, n=4). Conclusión: Nuestros resultados muestran que la transactivación del RFCE es un paso necesario en la ruta de señalización que desencadena el efecto Anrep.