La inhibición de la fosfodiesterasa 5A (FDE5A) disminuye la actividad del intercambiador Na+/H+ miocárdico (NHE1) por activación de la fosfatasa PP2A

DÍAZ RG; NOLLY MB; MASSARUTTI C; CASARINI MJ; GARCIARENA CD; ENNIS IL; CINGOLANI HE; PÉREZ NG

Congreso; LV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC). Reunión Científica Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2010

Nuestro objetivo fue profundizar la caracterización de la vía de señalización que vincula la inhibición de FDE5A con la disminución de la actividad del NHE1 que hemos reportado previamente. Se usaron músculos papilares aislados de rata. Se evaluó actividad del NHE1 mediante recuperación del pHi (eflujo de H+: JH+) post-acidosis transitorias o sostenidas (pulso de amonio). Se midió fosforilación de ERK1/2 (kinasas “upstream” NHE1) y del NHE1. La inhibición de FDE5A (1mM sildenafil, S) no alteró el pHi basal (control 7.28±0.02 vs. S 7.28±0.02, n=4) ni la actividad del NHE1 post-acidosis transitoria [JH+: 1.01±0.13 (control, n=5) vs. 0.95±0.13 (S, n=4)  mM/min], pero disminuyó la recuperación del pHi post-acidosis sostenida [JH+ 3.01±0.14 (control, n=13) vs 0.40±0.15 (S, n=4) mM/min, P<0.05). La acidosis sostenida aumentó la fosforilación de ERK1/2 (155±11% del control sin acidosis, n=10, P<0.05). La inhibición de MEK (10mM U0126) kinasa activadora de ERK1/2, canceló el aumento de ERK1/2 (104±15% n=8) y mimetizó el efecto de S sobre la función del NHE1 (JH+:0.56±0.12 mM/min, n=4). Sin embargo, S no canceló la activación de ERK1/2 (158±19%, n=7, P<0.05). Entonces pensamos que S podría estar activando fosfatasas (PP1 y/o PP2A) que directamente defosforilen al NHE1 sin alterar ERK1/2. La inhibición conjunta de PP1 y PP2A (1 mM ácido okadaico) canceló el efecto de S sobre el NHE1 (JH+: 2.51±0.14 mM/min, n=4). Similar resultado se obtuvo al inhibir sólo PP2A con ácido okadaico en dosis menor (1nM) (JH+: 2.95±0.16 mM/min, n=4) o más específicamente con endothall (100mM) (JH+: 3.00±0.16 mM/min, n=4). Consistentemente, la acidosis aumentó la fosforilación del NHE1 (139±6% del control sin acidosis, n=4, P<0.05), S canceló este efecto (109±5%, n=4) y endothall revirtió la acción de S (136±6%, n=4, P<0.05). Los resultados permiten sugerir que la inhibición de FDE5A disminuye la fosforilación y la actividad del NHE1 mediante un mecanismo que involucra activación de PP2A.