Rol de la interacción física/funcional del intercambiador Cl-/HCO3- AE3

VARGAS, LA; ALVAREZ BV

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

Sociedad Argentina de Fisiología-Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El intercambiador AE3 cataliza el intercambio electroneutro de Cl-/HCO3- a través de la membrana plasmática de celulas musculares cardíacas, regulando el pH intracelular (pHi). Por otro lado, la anhidrasa carbónica (AC), cataliza la conversión reversible de CO2 y HCO3- en tejidos cardíacos, participando en la homeostasis ionica. La asociación física y funcional del AE3 y la AC2 citoplasmática ha sido demostrada anteriormente. Esta asociación de AE3/AC2, denominada metabolon de transporte de HCO3-, maximiza los flujos de HCO3- mediados por AE3. Recientemente se identifico otra isoforma de la anhidrasa carbónica, la AC14, en el miocardio de mamíferos. La AC14 posee un único dominio transmembrana, y su sitio catalítico expuesto al medio extracelular. La asociación física entre AE3 y AC14 fue estudiada mediante experimentos de co-inmunoprecipitación, utilizando lisados ventriculares de corazones de ratas Wistar adultas. La CA14 fue inmunoprecipitada con anticuerpos contra las dos isoformas del AE3 expresadas en el miocardio de ratas, el AE3fl y el AE3c.  Del mismo modo, AE3fl y AE3c fueron inmunoprecipitados con anticuerpos contra CA14, en lisados de corazón, demostrando la interacción de AE3 y CA14 en el miocardio (n= 3).  Experimentos de inmunocitoquímica demostraron la co-localización del intercambiador AE3 y la AC14 en miocitos cardíacos aislados, mediante análisis por microscopía confocal. Finalmente, la interacción funcional de AE3 y CA14 fue estudiada en miocitos aislados de rata cargados con el indicador fluorescente BCECF-AM, determinando la tasa de alcalinización intracelular mediada por AE3 en un medio desprovisto de Cl-, por epifluorescencia.  El inhibidor de la anhidrasa carbónica impermeable a la membrana, benzolamida (10 mM), redujo la alcalinización mediada por AE3 en un 80%, comparado con control, confirmando de esta manera la asociación funcional de AE3 y CA14. Concluimos entonces que la actividad del intercambiador AE3 cardíaco es dependiente de su interacción física y funcional con la AC14, constituyendo entonces un medio efectivo para regular el pHi y eliminar productos de desecho celular como el CO2, en tejidos cardíacos.