Anticuerpos funcionales contra el co-transportador sodio-bicarbonato electrogénico de miocardio. Futura herramienta farmacológica?

DE GIUSTI, VC; ORLOWSKI, A; VILLA-ABRILLE, MC; CHIAPPE DE CINGOLANI, GE; ALVAREZ BV; AIELLO, EA

Rosario

Congreso; XXVIII Congreso Nacional de Cardiología; 2010

Federación Argentina de Cardiología

El cotransportador Na+/HCO3- (NBC) regula el pH intracelular (pHi). En el corazón existen dos isoformas del NBC, una electroneutra (NBC3) y otra electrogénica (NBC1). En el presente trabajo generamos anticuerpos moduladores de función (Ac) dirigidos contra los dominios extracelulares 3 (Acd3) y 4 (Acd4) del NBC1 cardíaco. Se utilizaron miocitos ventriculares de gato. Los Ac reconocieron al NBC1 por W-B y en preparados inmuno-histoquímicos (microscopía confocal). La actividad total del NBC se estudió por epifluorescencia realizando pulsos de amonio (se calcula el flujo de H+ (JH, mM/min) a pHi 6.8 tras inducir una acidosis) y la específica del NBC1 mediante una despolarización celular (pulsos de K+, delta pHi).  El pulso de K+ generó un aumento de pHi de 0.18±0.006 (n=5) que fue abolido con el Acd3 (0.016±0.019; n=5, p<0.05). Este Ac disminuyó un 50% el JH (0.59±0.08 vs 1.32±0.19; n=5, p<0.05). Sorpresivamente, el Acd4 generó un aumento del pHi en los pulsos de K+ de 0.25±0.018 (n=6, p<0.05) y un JH de 2.27±0.29 (n=6, p<0.05), ambos mayores al control. En experimentos de patch-clamp determinamos la duración del potencial de acción cardíaco (DPA) en ausencia y presencia de los Ac. El Acd3 alargó la DPA 17.08±5.9 % (n=6) y el Acd4 acortó la DPA 18.2±5.3 % (n=6), consistente con el bloqueo y activación, respectivamente, de la corriente aniónica generada por el NBC1. Concluimos que ambos Ac son capaces de reconocer al NBC1, pero que son funcionalmente opuestos: el Acd3 es inhibitorio y el Acd4 excitatorio. El empleo de estos anticuerpos es relevante para el estudio selectivo del NBC1 en la fisiopatología cardíaca y abre un camino para su potencial uso como herramienta terapéutica.