CIC   05421
CENTRO DE INVESTIGACIONES CARDIOVASCULARES "DR. HORACIO EUGENIO CINGOLANI"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La inhibición de la fosfodiesterasa 5A (FDE5A) disminuye la actividad del intercambiador Na+/H+ miocárdico (NHE1) por activación de la fosfatasa PP2A
Autor/es:
DÍAZ RG; NOLLY MB; MASSARUTTI C; CASARINI MJ; GARCIARENA CD; ENNIS IL; CINGOLANI HE; PÉREZ NG
Reunión:
Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), en conjunto con la Reunión Científica 2010 de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS) y la XLII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimen; 2010
Resumen:
Nuestro objetivo
fue profundizar la caracterización de la vía de señalización que vincula la
inhibición de FDE5A con la disminución de la actividad del NHE1 que hemos
reportado previamente. Se usaron músculos papilares aislados de rata. Se evaluó
actividad del NHE1 mediante recuperación del pHi (eflujo de H+:JH+) post-acidosis transitorias o sostenidas (pulso de
amonio). Se midió fosforilación de ERK1/2 (kinasas upstream NHE1) y del NHE1.
La inhibición de FDE5A (1mM
sildenafil, S) no alteró el pHi basal (control 7.28±0.02 vs. S 7.28±0.02, n=4) ni la actividad del NHE1
post-acidosis transitoria [JH+: 1.01±0.13 (control, n=5) vs. 0.95±0.13 (S, n=4)
mM/min], pero disminuyó la recuperación del pHi post-acidosis
sostenida [JH+ 3.01±0.14 (control, n=13) vs 0.40±0.15 (S, n=4) mM/min, P<0.05). La acidosis sostenida aumentó la
fosforilación de ERK1/2 (155±11% del control sin acidosis, n=10, P<0.05). La
inhibición de MEK (10mM U0126)
kinasa activadora de ERK1/2, canceló el aumento de ERK1/2 (104±15% n=8) y
mimetizó el efecto de S sobre la función del NHE1 (JH+: 0.56±0.12 mM/min, n=4). Sin embargo, S no canceló la
activación de ERK1/2 (158±19%, n=7, P<0.05). Entonces pensamos que S podría
estar activando fosfatasas (PP1 y/o PP2A) que directamente defosforilen al NHE1
sin alterar ERK1/2. La inhibición conjunta de PP1 y PP2A (1 mM ácido okadaico) canceló el efecto de S sobre
el NHE1 (JH+: 2.51±0.14 mM/min, n=4). Similar resultado se obtuvo al inhibir sólo PP2A con
ácido okadaico en dosis menor (1nM) (JH+: 2.95±0.16 mM/min, n=4) o más específicamente con
endothall (100mM) (JH+: 3.00±0.16 mM/min, n=4). Consistentemente, la
acidosis aumentó la fosforilación del NHE1 (139±6% del control sin acidosis,
n=4, P<0.05), S canceló este efecto (109±5%, n=4) y endothall revirtió la
acción de S (136±6%, n=4, P<0.05). Los resultados permiten sugerir que la
inhibición de FDE5A disminuye la fosforilación y la actividad del NHE1 mediante
un mecanismo que involucra activación de PP2A.