Generación de anticuerpos inhibitorios de la función del cotransportador sodio/bicarbonato cardíaco. Una posible futura herramienta terapéutica.

VERÓNICA C. DE GIUSTI; ALEJANDRO ORLOWSKI; ERNESTO A. AIELLO

Revista de la Federación Argentina de cardiología

Editorial FAC

Lugar: Buenos Aires; Año: 2010 vol. 40 p. 32 - 40

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RESUMENESUMEN El cotransportador Na+/HCO3 - (NBC) cardíaco es un importante mecanismo alcalinizante encargado de regular el pH intracelular (pHi) en las células cardíacas. En el corazón se han identificado al menos 3 isoformas del NBC: 1 electroneutra (NBC3), con estequiometria 1 Na+/ 1 HCO3 -, y 2 electrogénicas (NBC1 y NBC4), las cuales introducen 2 moléculas de HCO3 - por cada 1 de Na+. Dado que este último mecanismo genera una corriente aniónica repolarizante, su correcto funcionamiento es relevante en el control de la forma y duración del potencial de acción (PA). En el presente trabajo diseñamos anticuerpos contra el dominio extracelular 3 del NBC1 (a-L3) con el objeto de profundizar el estudio de su participación en la fisiología de la célula cardíaca utilizando miocitos ventriculares de rata Wistar. Se estudió la actividad del NBC total en la recuperación del pHi tras la imposición de una acidosis intracelular (pulsos de amonio; se obtiene el flujo de H+ (JH) a pHi 6.8), y la actividad exclusiva del NBC electrogénico durante la despolarización con alto K+ (pulsos de K+,
pHi a los 14 minutos de la despolarización). * indica p<0.05 respecto al control. El a-L3 reconoció a la proteína del NBC1 en preparados ventriculares. La alcalinización secundaria al alto K+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.+/HCO3 - (NBC) cardíaco es un importante mecanismo alcalinizante encargado de regular el pH intracelular (pHi) en las células cardíacas. En el corazón se han identificado al menos 3 isoformas del NBC: 1 electroneutra (NBC3), con estequiometria 1 Na+/ 1 HCO3 -, y 2 electrogénicas (NBC1 y NBC4), las cuales introducen 2 moléculas de HCO3 - por cada 1 de Na+. Dado que este último mecanismo genera una corriente aniónica repolarizante, su correcto funcionamiento es relevante en el control de la forma y duración del potencial de acción (PA). En el presente trabajo diseñamos anticuerpos contra el dominio extracelular 3 del NBC1 (a-L3) con el objeto de profundizar el estudio de su participación en la fisiología de la célula cardíaca utilizando miocitos ventriculares de rata Wistar. Se estudió la actividad del NBC total en la recuperación del pHi tras la imposición de una acidosis intracelular (pulsos de amonio; se obtiene el flujo de H+ (JH) a pHi 6.8), y la actividad exclusiva del NBC electrogénico durante la despolarización con alto K+ (pulsos de K+,
pHi a los 14 minutos de la despolarización). * indica p<0.05 respecto al control. El a-L3 reconoció a la proteína del NBC1 en preparados ventriculares. La alcalinización secundaria al alto K+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.(NBC) cardíaco es un importante mecanismo alcalinizante encargado de regular el pH intracelular (pHi) en las células cardíacas. En el corazón se han identificado al menos 3 isoformas del NBC: 1 electroneutra (NBC3), con estequiometria 1 Na+/ 1 HCO3 -, y 2 electrogénicas (NBC1 y NBC4), las cuales introducen 2 moléculas de HCO3 - por cada 1 de Na+. Dado que este último mecanismo genera una corriente aniónica repolarizante, su correcto funcionamiento es relevante en el control de la forma y duración del potencial de acción (PA). En el presente trabajo diseñamos anticuerpos contra el dominio extracelular 3 del NBC1 (a-L3) con el objeto de profundizar el estudio de su participación en la fisiología de la célula cardíaca utilizando miocitos ventriculares de rata Wistar. Se estudió la actividad del NBC total en la recuperación del pHi tras la imposición de una acidosis intracelular (pulsos de amonio; se obtiene el flujo de H+ (JH) a pHi 6.8), y la actividad exclusiva del NBC electrogénico durante la despolarización con alto K+ (pulsos de K+,
pHi a los 14 minutos de la despolarización). * indica p<0.05 respecto al control. El a-L3 reconoció a la proteína del NBC1 en preparados ventriculares. La alcalinización secundaria al alto K+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.i) en las células cardíacas. En el corazón se han identificado al menos 3 isoformas del NBC: 1 electroneutra (NBC3), con estequiometria 1 Na+/ 1 HCO3 -, y 2 electrogénicas (NBC1 y NBC4), las cuales introducen 2 moléculas de HCO3 - por cada 1 de Na+. Dado que este último mecanismo genera una corriente aniónica repolarizante, su correcto funcionamiento es relevante en el control de la forma y duración del potencial de acción (PA). En el presente trabajo diseñamos anticuerpos contra el dominio extracelular 3 del NBC1 (a-L3) con el objeto de profundizar el estudio de su participación en la fisiología de la célula cardíaca utilizando miocitos ventriculares de rata Wistar. Se estudió la actividad del NBC total en la recuperación del pHi tras la imposición de una acidosis intracelular (pulsos de amonio; se obtiene el flujo de H+ (JH) a pHi 6.8), y la actividad exclusiva del NBC electrogénico durante la despolarización con alto K+ (pulsos de K+,
pHi a los 14 minutos de la despolarización). * indica p<0.05 respecto al control. El a-L3 reconoció a la proteína del NBC1 en preparados ventriculares. La alcalinización secundaria al alto K+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.+/ 1 HCO3 -, y 2 electrogénicas (NBC1 y NBC4), las cuales introducen 2 moléculas de HCO3 - por cada 1 de Na+. Dado que este último mecanismo genera una corriente aniónica repolarizante, su correcto funcionamiento es relevante en el control de la forma y duración del potencial de acción (PA). En el presente trabajo diseñamos anticuerpos contra el dominio extracelular 3 del NBC1 (a-L3) con el objeto de profundizar el estudio de su participación en la fisiología de la célula cardíaca utilizando miocitos ventriculares de rata Wistar. Se estudió la actividad del NBC total en la recuperación del pHi tras la imposición de una acidosis intracelular (pulsos de amonio; se obtiene el flujo de H+ (JH) a pHi 6.8), y la actividad exclusiva del NBC electrogénico durante la despolarización con alto K+ (pulsos de K+,
pHi a los 14 minutos de la despolarización). * indica p<0.05 respecto al control. El a-L3 reconoció a la proteína del NBC1 en preparados ventriculares. La alcalinización secundaria al alto K+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular., y 2 electrogénicas (NBC1 y NBC4), las cuales introducen 2 moléculas de HCO3 - por cada 1 de Na+. Dado que este último mecanismo genera una corriente aniónica repolarizante, su correcto funcionamiento es relevante en el control de la forma y duración del potencial de acción (PA). En el presente trabajo diseñamos anticuerpos contra el dominio extracelular 3 del NBC1 (a-L3) con el objeto de profundizar el estudio de su participación en la fisiología de la célula cardíaca utilizando miocitos ventriculares de rata Wistar. Se estudió la actividad del NBC total en la recuperación del pHi tras la imposición de una acidosis intracelular (pulsos de amonio; se obtiene el flujo de H+ (JH) a pHi 6.8), y la actividad exclusiva del NBC electrogénico durante la despolarización con alto K+ (pulsos de K+,
pHi a los 14 minutos de la despolarización). * indica p<0.05 respecto al control. El a-L3 reconoció a la proteína del NBC1 en preparados ventriculares. La alcalinización secundaria al alto K+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.3 - por cada 1 de Na+. Dado que este último mecanismo genera una corriente aniónica repolarizante, su correcto funcionamiento es relevante en el control de la forma y duración del potencial de acción (PA). En el presente trabajo diseñamos anticuerpos contra el dominio extracelular 3 del NBC1 (a-L3) con el objeto de profundizar el estudio de su participación en la fisiología de la célula cardíaca utilizando miocitos ventriculares de rata Wistar. Se estudió la actividad del NBC total en la recuperación del pHi tras la imposición de una acidosis intracelular (pulsos de amonio; se obtiene el flujo de H+ (JH) a pHi 6.8), y la actividad exclusiva del NBC electrogénico durante la despolarización con alto K+ (pulsos de K+,
pHi a los 14 minutos de la despolarización). * indica p<0.05 respecto al control. El a-L3 reconoció a la proteína del NBC1 en preparados ventriculares. La alcalinización secundaria al alto K+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.por cada 1 de Na+. Dado que este último mecanismo genera una corriente aniónica repolarizante, su correcto funcionamiento es relevante en el control de la forma y duración del potencial de acción (PA). En el presente trabajo diseñamos anticuerpos contra el dominio extracelular 3 del NBC1 (a-L3) con el objeto de profundizar el estudio de su participación en la fisiología de la célula cardíaca utilizando miocitos ventriculares de rata Wistar. Se estudió la actividad del NBC total en la recuperación del pHi tras la imposición de una acidosis intracelular (pulsos de amonio; se obtiene el flujo de H+ (JH) a pHi 6.8), y la actividad exclusiva del NBC electrogénico durante la despolarización con alto K+ (pulsos de K+,
pHi a los 14 minutos de la despolarización). * indica p<0.05 respecto al control. El a-L3 reconoció a la proteína del NBC1 en preparados ventriculares. La alcalinización secundaria al alto K+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.i tras la imposición de una acidosis intracelular (pulsos de amonio; se obtiene el flujo de H+ (JH) a pHi 6.8), y la actividad exclusiva del NBC electrogénico durante la despolarización con alto K+ (pulsos de K+,
pHi a los 14 minutos de la despolarización). * indica p<0.05 respecto al control. El a-L3 reconoció a la proteína del NBC1 en preparados ventriculares. La alcalinización secundaria al alto K+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.+ (JH) a pHi 6.8), y la actividad exclusiva del NBC electrogénico durante la despolarización con alto K+ (pulsos de K+,
pHi a los 14 minutos de la despolarización). * indica p<0.05 respecto al control. El a-L3 reconoció a la proteína del NBC1 en preparados ventriculares. La alcalinización secundaria al alto K+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.+ (pulsos de K+,
pHi a los 14 minutos de la despolarización). * indica p<0.05 respecto al control. El a-L3 reconoció a la proteína del NBC1 en preparados ventriculares. La alcalinización secundaria al alto K+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.+ quedó totalmente abolida en presencia del a-L3 (0.17±0.02; n = 6 vs 0.02±0.02; n = 5*). El a-L3 redujo un 50% el JH durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.H durante la recuperación de la acidosis (3.3±0.4; n = 8 vs 1.71±0.3; n = 4*). En experimentos de patch-clamp perforado, el a-L3 prolongó la duración del PA 12.5±1.9% (n = 4), de manera consistente con el bloqueo del NBC1. Concluimos que el NBC1 es la única isoforma electrogénica activa en los miocitos ventriculares, participando equitativamente junto a la isoforma electroneutra NBC3 en la recuperación de la acidosis. Además, la corriente aniónica generada por el NBC1 se perfila como el principal componente de la corriente repolarizante imputada al NBC electrogénico. El uso del a-L3 podría ser relevante en el estudio diferencial de las isoformas del NBC en la fisiopatología cardiovascular.