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Introducción. Los complejos inmunoestimuladores, ISCOMs por su abreviatura en inglés (Immune stimulating complexes) fueron desarrollados para su utilización como adyuvantes (1). Los ISCOMs están compuestos de saponinas, colesterol y fosfolípidos que al combinarlos, solos o con el antígeno, forman estructuras tipo caja de un tamaño aproximado de 40nm. La disposición estructural que adquiere el antígeno al ser incorporado a la estructura del ISCOMs le confieren mayor inmunogenicidad, generando ventajas sobre las proteínas en forma monomérica, cuando son utilizadas como inmunógenos vacunales. Esta diferencia, probablemente, sea debido a que la disposición particular de la estructura que favorece la accesibilidad de los determinantes antigénicos expuestos por los ISCOMs (2). Asimismo, los ISCOMs resultaron ser un excelente soporte para antígenos en pruebas inmunoenzimáticas como el ELISA sobre todo para proteínas de membrana (3, 4). Los ISCOMs no han sido evaluados aún como soporte de antígenos recombinantes del virus de la Leucosis Enzoótica Bovina (LEB) en una prueba de ELISA.. El objetivo de este trabajo es comprobar que la proteína recombinante p24 del virus de la LEB es apto para ser incorporados a los ISCOMs y demostrar mediante una prueba de ELISA que mantiene su antigenicidad frente a sueros controles. Materiales y métodos. Previamente, la proteína p24 recombinante (p24r) se expresó satisfactoriamente en el sistema de E. coli utilizando el vector de expresión pQE-30. Para obtener los ISCOMs se siguieron los procedimientos previamente descriptos (1, 5) con pequeñas modificaciones: se procedió a la mezcla de los dos lípidos: fosfatidilcolina y el colesterol dejándose al descubierto en un flujo laminar hasta su secado total. A continuación la mezcla de lípidos deshidratada se disolvió en una solución de detergente (decanoil-N-metil-glucamida) al 20%. Paralelamente, se procedió a preparar la solución de saponina en agua tridestilada estéril agregándose la proteína p24r (200ug/ml) sólo a una de dos muestras (la otra fue utilizada como control negativo sin proteína). Ambas formulaciones fueron mezcladas vigorosamente. La mezcla se dializó durante 36 hs en buffer fosfato, las primeras 24 hs a temperatura ambiente y luego a 4ºC por el resto del tiempo estipulado. Entre ambas temperaturas se renovó el buffer. El producto dializado se concentró en tubos y se sometió a una purificación en gradiente de sucrosa (10/40% p/p). Se centrifugó a 30000g durante 6 horas a 20ºC y el material recuperado se evaluó en dos aspectos: 1- Morfológico, por microscopia electrónica de transmisión (MET) para corroborar la presencia y estructura de los ISCOMs. 2- Antigénico: por la técnica de Western blot para corroborar la presencia y antigenicidad de la proteína recombinante incorporada a los ISCOMs. Una vez verificados los aspectos morfológicos e inmunogénicos del ISCOM-p24r, se realizó una prueba de ELISA enfrentándolos con sueros controles positivos y negativos. Resultados y discusión. Como antígeno se utilizó la p24r obtenida en sistema bacteriano cuya antigenicidad fue efectivamente comprobada en trabajos anteriores. Durante los diferentes pasos de la formación del complejo antigénico ISCOM-p24r se corroboró la presencia del complejo. En el gradiente de sucrosa se observó la presencia de un halo blanquecino en la interface que corresponde a la formación de los ISCOMs y que fue corroborado por MET. La tinción del gel de poliacrilamida reveló la presencia de una banda de aproximadamente 24 kDa y por la técnica de Western blot se corroboró antigénicamente la incorporación del antígeno recombinante p24 al ISCOM. Por último, resultados preliminares de la prueba de ELISA determinaron que el complejo ISCOM-p24r discrimina efectivamente entre sueros control positivo y negativo. Los datos aquí presentados sugieren que el complejo ISCOM-p24r podría ser utilizado como antígeno diagnóstico en pruebas inmunoserológicas para diagnosticar LEB.