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Introducción La Leucosis bovina enzoótica (LBE) es una enfermedad linfoproliferativa del ganadobovino de distribución mundial y presente en nuestro país, causada por el retrovirus de la leucosis bovina (VLB (1). El impacto económico de esta enfermedad radica en las pérdidas por decomisos en frigorífico, disminución en la productividad y la pérdida de mercados de exportación de semen y embriones (2). El VLB, como otros retrovirus, contiene genes que codifican proteínas de importancia diagnóstica como la glicoproteína de superficie gp51 y la proteína mayoritaria de la cápside p24, ambas responsables de inducir una fuerte y persistente respuesta inmune humoral (3). En la actualidad, las pruebas serodiagnósticas se basan en la detección de anticuerpos solo contra gp51. La Infección por el VLB se diagnostica mediante la detección de anticuerpos en muestras de suero o leche. Los anticuerpos se detectan en el suero de la mayoría de los animales dentro de 2-8 semanas de la infección. Los métodos serológicos que seutilizan actualmente para la detección de los animales infectados son el ELISA y la prueba de inmunodifusión en gel de agar (IDGA). Las pruebas ELISA tiene una sensibilidad mucho mayor que la IDGA y son más adecuadas para realizarla a gran escala. Los títulos de anticuerpos fluctúan y, ocasionalmente, puede caer a niveles bajos, sobre todo en la gestación tardía o comienzo de la lactancia. Los niveles de anticuerpos puede caer por debajo del límite de detección por medio de pruebas IGDA, resultando en una resultado falso negativo (4). El objetivo general del presente trabajo es desarrollar un test diagnóstico que conlleve ambas proteínas, con la finalidad de aumentar la sensibilidad de la prueba. Materiales y métodos Para tal fin, se realizó la expresión recombinante de ambas proteínas en los sistemas de E. coli y Baculovirus, con el objetivo de evaluar el sistema de expresión más eficaz y conveniente, y posteriormente utilizar las proteínas recombinantes como antígeno diagnóstico. Para el sistema de Baculovirus, se utilizó un sistema comercial de baculovirus, BaculoDirect GST Gateway®, y para el sistema bacteriano se utilizó el vector de expresión pQE-30 para E. coli. El ADN de los genes que codifica para ambas proteínas se obtuvo por PCR, a partir del ADN genómico de células FLK crónicamente infectadas con VLB. Se utilizaron primers diseñados de acuerdo a la secuencia de referencia (Sagata N., 1985), con las especificaciones para cada sistema de expresión. Para comprobar la expresión de las proteínas se realizó la técnica de SDS-PAGE, para detectar la presencia de bandas correspondiente al peso molecular de las proteínas buscadas. Se prosiguió con la técnica de Western blot para comprobar la autenticidadantigénica de las proteínas recombinantes frente a suero control positivo internacional y sueros de animales infectados experimentalmente. Se procedió al desarrollo y puesta punto de una técnica de ELISA dual para la detección de anticuerpos contra las proteínas gp51 y p24 del VLB. Se recurrió al sistema de damero para la estandarización de los reactivos, determinando cuantas veces esta contenido el valor negativo en el valor positivo. Resultados y discusión En la tinción del gel de polyacrylamida se identificó la expresión de 2 bandas de peso molecular correspondiente a las proteínas p24 y gp51 nativas del VLB. Por la técnicade Western blot se determinó La autenticidad antigénica de las mismas frente a los sueros control. La expresión recombinante de la proteína gp51 por el sistema de Baculovirus y la proteína p24 por el sistema de E. coli resultaron ser los sistemas más conveniente y eficaces para la producción de antígeno diagnóstico. La optimización y estandarización de los antígenos recombinantes, los sueros control y anticuerpos conjugados, realizados por el sistema de damero, arrojó resultados parciales muy alentadores para continuar con el desarrollo y verificación de las características operativas de la prueba de ELISA Dual p24/gp51. El empleo de esta prueba en el diagnóstico serológico de la infección, posibilitaría la capacidad de aumentar la sensibilidad de la técnica diagnóstica.