Pentadecapéptido asociado a INGAP (INGAP-PP): Efecto sobre la diferenciación de células madre embrionarias de ratón hacia células productoras de insulina.

FRANCINI F; DEL ZOTTO H; NAUJOK O; MASSA ML; JÖRNS A.; LENZEN S; GAGLIARDINO JJ

Buenos Aires Argentina

Jornada; Reunión Invernal Sociedad Argentina de Patología; 2007

Sociedad Argentina de Patología

Introducción: la escasez de donantes de islotes pancreáticos para la terapia de reemplazo en pacientes con diabetes tipo I ha abierto la búsqueda de fuentes alternativas tales como el uso de células madre embrionarias (CME). Objetivo: evaluar el efecto del INGAP-PP sobre la diferenciación de CME murinas hacia células endocrinas insulares. Materiales y Métodos: CME (línea ES-D3) se cultivaron según el protocolo de diferenciación de Lumelsky con/sin agregado de INGAP-PP (1µg/µl) al medio de cultivo (25 días). Se aisló ARN y se cuantificó la expresión génica mediante PCR tiempo real. Las células resultantes se estudiaron por microscopía de luz y electrónica (ME). Mediante anticuerpos específicos se identificaron células positivas para insulina, somatostatina, glucagón, Pdx-1, Ngn-3 y Nkx-6.1. La replicación celular se estimó mediante detección de PCNA. Como indicador de apoptosis se midió la expresión génica y actividad de caspasa-3 (pro-apoptótica) y Bcl2 (anti-apoptótica). Resultados: INGAP-PP aumenta la expresión génica de IAPP, Glut-2, Kir-6.2, Sur-1 e insulina y disminuye la expresión génica y proteica de glucagón y somatostatina. La expresión génica de PDX-1 aumentó 115% en células tratadas, así como la inmunopositividad para PDX-1, Ngn-3 y Nkx-6.1. No se registraron cambios en la expresión y actividad de caspasa-3 y Bcl2 en ambos grupos experimentales. En ME, 30% de las células diferenciadas mostraron signos de apoptosis, pero sin diferencias significativas entre ambas condiciones. Conclusiones: El INGAP-PP induce la expresión de genes y proteínas características de células precursoras β o células β maduras, con un aparato capaz de reconocer la glucosa y expresión del gen de insulina. Estos resultados abren nuevas perspectivas en el efecto del INGAP-PP sobre el desarrollo y diferenciación de células β utilizables para terapia de reemplazo en condiciones donde las mismas se encuentran disminuidas. : El INGAP-PP induce la expresión de genes y proteínas características de células precursoras β o células β maduras, con un aparato capaz de reconocer la glucosa y expresión del gen de insulina. Estos resultados abren nuevas perspectivas en el efecto del INGAP-PP sobre el desarrollo y diferenciación de células β utilizables para terapia de reemplazo en condiciones donde las mismas se encuentran disminuidas. la escasez de donantes de islotes pancreáticos para la terapia de reemplazo en pacientes con diabetes tipo I ha abierto la búsqueda de fuentes alternativas tales como el uso de células madre embrionarias (CME). Objetivo: evaluar el efecto del INGAP-PP sobre la diferenciación de CME murinas hacia células endocrinas insulares. Materiales y Métodos: CME (línea ES-D3) se cultivaron según el protocolo de diferenciación de Lumelsky con/sin agregado de INGAP-PP (1µg/µl) al medio de cultivo (25 días). Se aisló ARN y se cuantificó la expresión génica mediante PCR tiempo real. Las células resultantes se estudiaron por microscopía de luz y electrónica (ME). Mediante anticuerpos específicos se identificaron células positivas para insulina, somatostatina, glucagón, Pdx-1, Ngn-3 y Nkx-6.1. La replicación celular se estimó mediante detección de PCNA. Como indicador de apoptosis se midió la expresión génica y actividad de caspasa-3 (pro-apoptótica) y Bcl2 (anti-apoptótica). Resultados: INGAP-PP aumenta la expresión génica de IAPP, Glut-2, Kir-6.2, Sur-1 e insulina y disminuye la expresión génica y proteica de glucagón y somatostatina. La expresión génica de PDX-1 aumentó 115% en células tratadas, así como la inmunopositividad para PDX-1, Ngn-3 y Nkx-6.1. No se registraron cambios en la expresión y actividad de caspasa-3 y Bcl2 en ambos grupos experimentales. En ME, 30% de las células diferenciadas mostraron signos de apoptosis, pero sin diferencias significativas entre ambas condiciones. Conclusiones: El INGAP-PP induce la expresión de genes y proteínas características de células precursoras β o células β maduras, con un aparato capaz de reconocer la glucosa y expresión del gen de insulina. Estos resultados abren nuevas perspectivas en el efecto del INGAP-PP sobre el desarrollo y diferenciación de células β utilizables para terapia de reemplazo en condiciones donde las mismas se encuentran disminuidas. : El INGAP-PP induce la expresión de genes y proteínas características de células precursoras β o células β maduras, con un aparato capaz de reconocer la glucosa y expresión del gen de insulina. Estos resultados abren nuevas perspectivas en el efecto del INGAP-PP sobre el desarrollo y diferenciación de células β utilizables para terapia de reemplazo en condiciones donde las mismas se encuentran disminuidas.