Efecto del pentadecapéptido asociado a INGAP (INGAP-PP) sobre la diferenciación de células madre embrionarias hacia células productoras de insulina

FRANCINI F; DEL ZOTTO H; NAUJOK O; MASSA ML; JORNS A; LENZEN S; GAGLIARDINO JJ

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LII Reunión Científica Anual SAIC; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica y Sociedad Argentina de Inmunología

La escasez de donantes de páncreas para la terapia de re­emplazo en pacientes con diabetes tipo 1 ha promovido la bús­queda de fuentes alternativas tales como el uso de células ma­dre embrionarias (CME). Objetivo: evaluar el efecto del penta­decapéptido del INGAP (INGAP-PP) sobre la diferenciación de CME murinas hacia células endocrinas insulares. Métodos: Cé­lulas ES-D3 se diferenciaron (según protocolo de Lumelsky), en medio cls agregado de INGAP-PP (1 µg/µI) (25 días). En las cé­lulas resultantes se aisló ARN y cuantificó la expresión de genes marcadores de células endocrinas (qPCR) y se estudió su es­tructura y ultraestructura. Empleando anticuerpos específicos se identificaron células positivas para insulina, somatostatina, glucagón, Pdx-1, Ngn-3 y Nkx-6.1. La replicación celular se es­timó mediante detección de PCNA. Como indicador de apoptosis se midió la expresión génica y actividad de caspasa-3 (pro­apoptótica) y Bcl2 (anti-apoptótica). Resultados: INGAP-PP aumentó la expresión génica de IAPP (+115%**Glut-2 (+87%)*, Kir-6.2 (+62%)*, Sur-1 (+202%, e insulina (+53%)* y disminuyó la expresión génica y proteica de glucagón (-71 %**) y somatostatina (-62%)**. Asimismo aumentó la expresión génica de PDX-1 (115%**) y la inmuno-positividad para PDX-1*, Ngn­3* y Nkx-6.1*. No verificamos cambios en la expresión y activi­dad de caspasa-3 y Bcl2. La expresión génica de cyc-1 y la inmunopositividad para PCNA disminuyeron significativamente (-35%***) (P<0.05). El 30% de las células diferenciadas mostró sig­nos de apoptosis similares en ambas condiciones. En todos los casos *P<0.01 y **P<0.001. Conclusiones: INGAP-PP induce la expresión de genes y proteinas características de células pre­cursoras y o células y maduras, con un sensor de glucosa y ex­presión del gen de insulina. El efecto favorable del INGAP-PP sobre el desarrollo y diferenciación de células abre nuevas perspectivas para terapia de reemplazo cuando ellas están anormalmente disminuidas.