Diferenciación de células madre embrionarias (CME) a células productoras de insulina: efecto del pentadecapéptido de INGAP (Islet Neogenesis Associated Protein) (INGAP-PP)

FRANCINI F; DEL ZOTTO H; NAUJOK O; MASSA ML; JORNS A; LENZEN S; GAGLIARDINO JJ

La Habana Cuba

Congreso; XIII CONGRESO ALAD, VII CONGRESO CUBANO DE DIABETES; 2007

Asociación Latinoamericana de Diabetes

Objetivo: evaluar el efecto deI INGAP-PP sobre la diferenciación de CME murinas hacia células productoras de insulina. Materiales y métodos: Utilizamos CME (ES-D3) y el protocolo de diferenciación de Lumelsky con/sin agregado de INGAP-PP (1 µg/µI) al medio de cultivo (25 días). Se aisló y cuantificó ARNm mediante qPCR. Las células resultantes se estudiaron mediante microscopía de luz y electrónica (ME). Identificamos células positivas para insulina, somatostatina, glucagón, Pdx-1, Ngn-3 y Nkx-6.l empleando anticuerpos específicos. La replicación celular se midió mediante PCNA y la apoptosis mediante la expresión génica y actividad de caspasa-3 (pro-apoptótica) y Bcl2 (anti-apoptótica). Resultados: INGAP-PP aumentó la expresión génica de IAPP, Glut-2, Kir-6.2, Sur-l, Pdx-1, Nkx-6.l e insulina y disminuyó la expresión génica y proteica de glucagón y somatostatina. También aumentó el número de células PDX-1, Ngn-3 y Nkx-6.1 positivas. El INGAP-PP no indujo cambios en la expresión y actividad de caspasa-3 y Bcl2. En la ME el 30% de las células diferenciadas con o sin INGAP­PP mostraron signos de apoptosis. Conclusiones: El INGAP-PP promueve la diferenciación de CME a células con caracteristica de células precursoras B o células B maduras, con componentes capaces de reconocer glucosa y expresión del gen de insulina. Estos resultados abren nuevas perspectivas sobre el empleo del INGAP-PP para promover el desarrollo y diferenciación de células B utilizables para terapia de reemplazo en personas con disminución de la masa de estas células.