Mecanismo molecular del bloqueo del canal BK por el anestésico local bupivacaína en células de músculo liso de la arteria umbilical humana

MARTÍN, P

Buenos Aires

Congreso; Reunión Anual 2014 de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2014

Sociedad Argentina de Fisiología

Introducción: La bupivacaína (BPV) es un anestésico local perteneciente al grupo de las amidas. Su acción terapéutica como anestésico generalmente se relaciona con su capacidad de inhibir los canales de sodio dependientes de voltaje. Sin embargo, se ha reportado que además puede inhibir canales de potasio dependientes de voltaje por distintos mecanismos. Esta acción podría explicar la contracción que BPV genera en diversos vasos sanguíneos. Métodos: Se probó el efecto de BPV sobre las corrientes mediadas por canales BK a nivel de canal único y de célula entera utilizando la técnica de patch-clamp en células de músculo liso vascular de la arteria umbilical humana (CMLV AUH) y en células HEK293T transfectadas con la subunidad α de dicho canal. Resultados: A nivel de canal único de las CMLV AUH la BPV produce un bloqueo de tipo flickery, caracterizado por una disminución en la amplitud de la corriente unitaria y un aumento del nivel del ruido del estado abierto del canal. Este efecto es concentración y voltaje dependiente (KD = 965, 727, 485 y 325 µM a +20, +40, +60 y +80 mV, respectivamente, n=5-12). La dependencia de voltaje del bloqueo, permitió estimar que el bloqueo se produce desde la cara intracelular del canal y la localización eléctrica del mismo (δ=0,46). En acuerdo con estos resultados, a nivel de célula entera, la BPV 300 µM también bloqueó las corrientes BK de las CMLV AUH. Con el fin de comprobar que el bloqueo se genera por la BPV protonada actuando a nivel de la subunidad α del canal, se ensayó el efecto de BPV 300 µM sobre las corrientes del canal BK expresado células HEK293T a distintos valores de pH, donde observamos que el bloqueo es mayor en pH ácidos donde aumenta la proporción de BPV protonada (Gmax(BPV)/ Gmax(control): 0.525 (pH 6) vs. 0.722 (pH 7.4)). Conclusión: Se demostró el bloqueo a nivel del poro de permeación del canal BK por la BPV, un canal iónico implicado en diversas funciones celulares y de particular importancia en las CMLV.