Diferenciación de células madre embrionarias murinas a células productoras de insulina inducida por INGAP-PP

FRANCINI F; DEL ZOTTO H; NAUJOK O; MASSA ML; JÖRNS A; LENZEN S; GAGLIARDINO JJ

Facultad Ciencias Médicas La Plata

Jornada; Jornadas de Medicina 2007 de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNLPFra; 2007

Facultad de Ciencias Médicas

Introducción: La escasez de donantes de páncreas para la terapia de reemplazo en pacientes con diabetes tipo I ha promovido la búsqueda de fuentes alternativas tales como el uso de células madre embrionarias (CME). Objetivo: evaluar el efecto del pentadecapéptido del INGAP (INGAP-PP) sobre la diferenciación de CME murinas hacia células endocrinas insulares. Métodos: Células ES-D3 se diferenciaron (según protocolo de Lumelsky), en medio c/s agregado de INGAP-PP (1µg/µl) (25 días). En las células resultantes se aisló ARN y cuantificó la expresión de genes marcadores de células endocrinas (qPCR) y se estudió su estructura y ultraestructura. Empleando anticuerpos específicos se identificaron células positivas para insulina, somatostatina, glucagón, Pdx-1, Ngn-3 y Nkx-6.1. La replicación celular se estimó mediante detección de PCNA. Como indicador de apoptosis se midió la expresión génica y actividad de caspasa-3 (pro-apoptótica) y Bcl2 (anti-apoptótica). Resultados: INGAP-PP aumentó la expresión génica de IAPP (+115%)**, Glut-2 (+87%)*, Kir-6.2 (+62%)*, Sur-1 (+202%)** e insulina (+53%)* y disminuyó la expresión génica y proteica de glucagón (-71%**) y somatostatina (-62%)**. Asimismo aumentó la expresión génica de PDX-1 (115%**) y la inmunopositividad para PDX-1*, Ngn-3* y Nkx-6.1*. No verificamos cambios en la expresión y actividad de caspasa-3 y Bcl2. La expresión génica de cyc-1 y la inmunopositividad para PCNA disminuyeron significativamente (-35%***)(p<0.05). El 30% de las células diferenciadas mostró signos de apoptosis similares en ambas condiciones. En todos los casos *p<0.01 y **p<0.001. Conclusiones: INGAP-PP induce la expresión de genes y proteínas características de células precursoras β o células β maduras, con un sensor de glucosa y expresión del gen de insulina. El efecto favorable del INGAP-PP sobre el desarrollo y diferenciación de células β abre nuevas perspectivas para terapia de reemplazo cuando ellas están anormalmente disminuidas. La escasez de donantes de páncreas para la terapia de reemplazo en pacientes con diabetes tipo I ha promovido la búsqueda de fuentes alternativas tales como el uso de células madre embrionarias (CME). Objetivo: evaluar el efecto del pentadecapéptido del INGAP (INGAP-PP) sobre la diferenciación de CME murinas hacia células endocrinas insulares. Métodos: Células ES-D3 se diferenciaron (según protocolo de Lumelsky), en medio c/s agregado de INGAP-PP (1µg/µl) (25 días). En las células resultantes se aisló ARN y cuantificó la expresión de genes marcadores de células endocrinas (qPCR) y se estudió su estructura y ultraestructura. Empleando anticuerpos específicos se identificaron células positivas para insulina, somatostatina, glucagón, Pdx-1, Ngn-3 y Nkx-6.1. La replicación celular se estimó mediante detección de PCNA. Como indicador de apoptosis se midió la expresión génica y actividad de caspasa-3 (pro-apoptótica) y Bcl2 (anti-apoptótica). Resultados: INGAP-PP aumentó la expresión génica de IAPP (+115%)**, Glut-2 (+87%)*, Kir-6.2 (+62%)*, Sur-1 (+202%)** e insulina (+53%)* y disminuyó la expresión génica y proteica de glucagón (-71%**) y somatostatina (-62%)**. Asimismo aumentó la expresión génica de PDX-1 (115%**) y la inmunopositividad para PDX-1*, Ngn-3* y Nkx-6.1*. No verificamos cambios en la expresión y actividad de caspasa-3 y Bcl2. La expresión génica de cyc-1 y la inmunopositividad para PCNA disminuyeron significativamente (-35%***)(p<0.05). El 30% de las células diferenciadas mostró signos de apoptosis similares en ambas condiciones. En todos los casos *p<0.01 y **p<0.001. Conclusiones: INGAP-PP induce la expresión de genes y proteínas características de células precursoras β o células β maduras, con un sensor de glucosa y expresión del gen de insulina. El efecto favorable del INGAP-PP sobre el desarrollo y diferenciación de células β abre nuevas perspectivas para terapia de reemplazo cuando ellas están anormalmente disminuidas.