Efecto de diferentes protocolos e la diferenciación de células madre embrionarias de ratón a células productoras de insulina

FRANCINI F., NAUJOK O., JÖRNS A., LENZEN S

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica y Sociedad Argentina de Inmunología

El objetivo del trabajo fue comparar el efecto de diferentes protocolos de diferenciación sobre la expresión génica y morfología de células madre embrionarias (CME) de ratón. Para ello se diferenciaron CME, según 4 protocolos. La expresión génica se midió por real-time PCR y la morfología mediante microscopía electrónica (ME). Los resultados obtenidos muestran que CME diferenciadas en 1) medio sin suero fetal bovino (SFB) expresan marcadores génicos de diferenciación endocrina. ME: 20% de células son diferenciadas, con alto grado de apoptosis (30-40%). 2) 5% SFB en el medio en el estadio de diferenciación, disminuyó la expresión de insulina 50%, igual que glucagón y somatostatina (p<005). La expresión de Glut-2 (199%), Sur-1 (215%), Kir6.2 (149%), Nestina (319%) y Nkx6.1 (206%) aumentó respecto al protocolo de referencia (p<0.01). ME: aumento de células con características endocrinas y elevado grado de diferenciación (40-60%) con niveles de apoptosis constantes. 3) La omisión del paso de selección de células nestina positivas, normalizó la expresión de insulina (114%) y aumentó significativamente (p<0.05) otros genes marcadores (Glut-2 196%, Sur1 148%, Kir6.2 145%), ME: alto grado de diferenciación celular (40%). 4) En suspensión, la expresión de marcadores endocrinos disminuyó significativamente (Insulina 28%, glucagon no determinable, somatostatina 17%, Glut-2 86%, Sur1 66% Kir6.2 37%, nestina 23% y Nkx6.1 37%, p<0.01). Sólo la expresión de Oct-4 (276%) y Eras (300%) (marcadores de CME) aumentó (p<0.001). ME: fenotipo embrionario con poca diferenciación (0-5%). En conclusión las condiciones de cultivo afectan la diferenciación de CME a células productoras de insulina. Se estableció un protocolo que induce la expresión de insulina y otros marcadores génicos beta específicos en células con morfología símil a célula beta, y al mismo tiempo reduce la apoptosis. Estas células representan una fuente potencial de insulina para la terapia de reemplazo en diabetes.