Diferenciación de células madre embrionarias de ratón a células productoras de insulina: diferentes protocolos

FRANCINI F., NAUJOK O., JÖRNS A., LENZEN S.

Mendoza Argentina

Congreso; XV Congreso Argentino de Diabetes; 2006

Sociedad Argentina de Diabetes

Objetivo: comparar el efecto de diferentes protocolos de diferenciación sobre la expresión génica y morfología de células madre embrionarias (CME) murinas. Materiales y Métodos: Se diferenciaron CME, según 4 protocolos. La expresión génica se midió por real-time PCR y la morfología mediante microscopía electrónica (ME). Resultados: CME diferenciadas en 1) medio sin suero fetal bovino (SFB) expresan marcadores génicos de diferenciación endocrina. ME: 20% de células son diferenciadas, con elevado grado de apoptosis (30-40%). 2) En medio con 5% SFB en el estadio de diferenciación, la expresión de insulina disminuyó 50%, igual que glucagón y somatostatina. La expresión de Glut-2 (199%), Sur-1 (215%), Kir6.2 (149%), Nestina (319%) y Nkx6.1 (206%) aumentó respecto al protocolo de referencia. ME: se determinó un aumento de células con características endocrinas y elevado grado de diferenciación (40-60%). Los niveles de apoptosis se mantuvieron constantes. 3) La omisión del paso de selección de células nestina positivas, normalizó la expresión de insulina (114%) y aumentó otros genes marcadores (Glut-2 196%, Sur1 148%, Kir6.2 145%), ME: elevado grado de diferenciación celular (40%). 4) En suspensión, la expresión de marcadores endocrinos disminuyó significativamente (Insulina 28%, glucagon no determinable, somatostatina 17%, Glut-2 86%, Sur1 66% Kir6.2 37%, nestina 23% y Nkx6.1 37%). Sólo la expresión de Oct-4 (276%) y Eras (300%) (marcadores de células madre) aumentó. ME: fenotipo embrionario con poca diferenciación (0-5%). Conclusiones: Diferentes condiciones de cultivo afectan la diferenciación de CME a células productoras de insulina. Se estableció un protocolo que induce la expresión de insulina y otros marcadores génicos beta específicos en células con morfología símil a célula beta, y al mismo tiempo reduce la apoptosis. Estas células representan una fuente potencial de insulina para la terapia de reemplazo en diabetes. comparar el efecto de diferentes protocolos de diferenciación sobre la expresión génica y morfología de células madre embrionarias (CME) murinas. Materiales y Métodos: Se diferenciaron CME, según 4 protocolos. La expresión génica se midió por real-time PCR y la morfología mediante microscopía electrónica (ME). Resultados: CME diferenciadas en 1) medio sin suero fetal bovino (SFB) expresan marcadores génicos de diferenciación endocrina. ME: 20% de células son diferenciadas, con elevado grado de apoptosis (30-40%). 2) En medio con 5% SFB en el estadio de diferenciación, la expresión de insulina disminuyó 50%, igual que glucagón y somatostatina. La expresión de Glut-2 (199%), Sur-1 (215%), Kir6.2 (149%), Nestina (319%) y Nkx6.1 (206%) aumentó respecto al protocolo de referencia. ME: se determinó un aumento de células con características endocrinas y elevado grado de diferenciación (40-60%). Los niveles de apoptosis se mantuvieron constantes. 3) La omisión del paso de selección de células nestina positivas, normalizó la expresión de insulina (114%) y aumentó otros genes marcadores (Glut-2 196%, Sur1 148%, Kir6.2 145%), ME: elevado grado de diferenciación celular (40%). 4) En suspensión, la expresión de marcadores endocrinos disminuyó significativamente (Insulina 28%, glucagon no determinable, somatostatina 17%, Glut-2 86%, Sur1 66% Kir6.2 37%, nestina 23% y Nkx6.1 37%). Sólo la expresión de Oct-4 (276%) y Eras (300%) (marcadores de células madre) aumentó. ME: fenotipo embrionario con poca diferenciación (0-5%). Conclusiones: Diferentes condiciones de cultivo afectan la diferenciación de CME a células productoras de insulina. Se estableció un protocolo que induce la expresión de insulina y otros marcadores génicos beta específicos en células con morfología símil a célula beta, y al mismo tiempo reduce la apoptosis. Estas células representan una fuente potencial de insulina para la terapia de reemplazo en diabetes.