Actividad de glucoquinasa hepática en ratas con insulinorresistencia inducida

MASSA L; LENZEN S; GAGLIARDINO JJ

Mar del Plata

Congreso; LI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica – LIV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La actividad de glucoquinasa (GK) hepática es modulada por una proteína reguladora (PR) nuclear que al unirse a la fructosa-1-P induce traslocación y activación de la enzima. En células productoras de insulina, la actividad de GK es regulada por la 6-fosfofructo-2-quinasa/fructosa-2,6-bisfosfatasa (PFK2). Se desconoce como actúan estos mecanismos in vivo en condiciones normales y patológicas. Objetivo: Evaluar el efecto de la insulinorresistencia (IR) inducida por dieta rica en fructosa (DRF) y de la PFK2 sobre la actividad de GK hepática. Metodología: Alimentamos ratas Wistar adultas con dieta comercial sin (C) o con el agregado de fructosa (F) al 10 % en el agua de bebida. A los 21 días medimos glucemias (G), trigliceridemias (TG) e insulinemias (I). Posteriormente extrajimos el hígado para 1) determinar niveles de ADNc de GK y PFK2 (RT-PCR) y 2) separar las fracciones citoplasmática (FC) y nuclear (FN) (homogeneización y centrifugación a 600 g) e incubar la FN con digitonina (40 µg/ml). En las fracciones FC y FN medimos actividad de GK (espectrofluorometría) y expresión de GK y PFK2 (Western blot). Resultados: (F vs. C): G 148 ± 4 vs. 129 ± 5 mg%, p<0.05; TG 113.9 ± 7 vs. 67.6 ± 7 mg/dl, p<0.001; I 4.4 ± 0.6 vs. 2.7 ± 0.5 ng/ml, p<0.02; actividad de GK citoplasmática respecto actividad total (% C/T) 85.5 ± 2.6 vs. 32.8 ± 1.7, p<0.001. La expresión de GK en FC fue similar en ambos grupos, pero no se detectó GK en la fracción FN del grupo F. La expresión de PFK2 en FC fue mayor en las ratas F (500 vs.100 %). La transcripción de GK y PFK2 fue similar en ambos grupos: (F vs. C), GK: 55.5 vs. 57.2%; PFK2: 45 vs. 42%. Conclusiones: La IR inducida por DRF aumenta la actividad de GK hepática promoviendo su traslocación al citoplasma y su interacción con la PFK2 sin afectar su expresión; ésta es la primera demostración in vivo del efecto modulador de PFK2 sobre la actividad de GK hepática.