CENEXA   05419
CENTRO DE ENDOCRINOLOGIA EXPERIMENTAL Y APLICADA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Regulación in vivo de la actividad de glucoquinasa hepática
Autor/es:
MASSA L; LENZEN S; GAGLIARDINO JJ
Lugar:
Mendoza
Reunión:
Congreso; XV Congreso Argentino de Diabetes; 2006
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Diabetes
Resumen:
La actividad de glucoquinasa (GQ) hepática es modulada por una proteína reguladora (PR) nuclear. La unión de la PR a fructosa-1-P induce traslocación y activación de la GQ. En células productoras de insulina, la actividad de GQ es regulada por la 6-fosfofructo-2-quinasa/fructosa-2,6-bisfosfatasa (PFK2). Se desconoce como actúan estos mecanismos in vivo en condiciones normales y patológicas. Objetivo: Evaluar el efecto de la insulinorresistencia (IR) inducida por dieta rica en fructosa (DRF) y de la PFK2 sobre la actividad de GK hepática. Metodología: Alimentamos ratas Wistar adultas con dieta comercial sin (C) o con el agregado de fructosa (F) al 10 % en el agua de bebida. A los 21 días medimos glucemias (G), trigliceridemias (TG) e insulinemias (I). Posteriormente extrajimos el hígado para 1) determinar niveles de ADNc de GQ y PFK2 (RT-PCR) y 2) separar las fracciones citoplasmática (FC) y nuclear (FN) (homogeneización y centrifugación a 600 g) e incubar la FN con digitonina (40 µg/ml). En las fracciones FC y FN medimos actividad de GQ (espectrofluorometría) y expresión de GQ y PFK2 (Western blot). Resultados: (F vs. C): G 148 ± 4 vs. 129 ± 5 mg%, p<0.05; TG 113.9 ± 7 vs. 67.6 ± 7 mg/dl, p<0.001; I 4.4 ± 0.6 vs. 2.7 ± 0.5 ng/ml, p<0.02; actividad de GQ citoplasmática respecto actividad total (% C/T) 85.5 ± 2.6 vs. 32.8 ± 1.7, p<0.001. Mientras la expresión de GQ en FC fue similar en ambos grupos, no se detectó GQ en la fracción FN del grupo F. La expresión de PFK2 en FC fue mayor en las ratas F (500 vs.100 %). La transcripción de GQ y PFK2 fue similar en ambos grupos: (F vs. C), GK: 55.5 vs. 57.2%; PFK2: 45 vs. 42%. Conclusiones: La IR inducida por DRF aumenta la actividad de GQ hepática promoviendo su traslocación al citoplasma y su interacción con la PFK2 sin afectar su expresión; ésta es la primera demostración in vivo del efecto modulador de PFK2 sobre la actividad de GQ hepática.