Metodología para el estudio in vitro a largo plazo de vasos humanos mantenidos en condiciones no proliferativas

MONCADA MELISA; LAFOURCADE MAGDALENA; VALDEZ JUAN MANUEL; REBOLLEDO ALEJANDRO; ROLDÁN PALOMO ANA ROCÍO

Buenos Aires

Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

Objetivos: generar una metodología in vitro que permita mantener la contractilidad de un vaso humano a largo plazo y en condiciones que no favorezcan la proliferación celular. Metodología: se evaluó la respuesta contráctil de anillos vasculares de arteria umbilical humana (AUH) midiendo el desarrollo de fuerza isométrica (en g fuerza / g peso) producido por i. un estímulo despolarizante (aumento de la concentración extracelular de KCl hasta 80 mM) y ii. serotonina (5-HT 0,1 µM y 1 µM) en condiciones control (sin incubación) y luego de distintos tiempos de incubación (1, 2, 3, 4, 5 y 6 días) en medios de cultivo comerciales sin suero fetal bovino. Se utilizó DMEM alta glucosa (30 mM) y DMEM baja glucosa (5,5 mM). El grupo control lo constituyen los anillos evaluados inmediatamente luego de la extracción de la arteria y el grupo incubado anillos del mismo cordón incubados en cada uno de los medios descriptos a 37ºC y atmósfera de CO2. Cada 24 hs se extrajeron anillos de cada uno de los grupos incubados y se evaluó la respuesta contráctil. Resultados: en ambas condiciones de incubación las arterias conservaron la capacidad de contraerse durante los 6 días. Se observó que en DMEM baja glucosa los valores medios de fuerza evocados por KCl 80 mM fueron mayores que el control (153,5±13 gF/gP; n=13), alcanzando significancia estadística a las 48 hs (192,8±51 gF/gP; n=8) y a las 120 hs (312,4±26 gF/gP; n=10). Una tendencia similar se observó con 5-HT 1 µM, siendo la fuerza significativamente mayor a las 120 hs de incubación (control 173,3±23 gF/gP; n=13 vs. 383,7±47 gF/gP; n=10). En presencia de 5-HT 0,1 µM la contractilidad no mostró cambios estadísticamente significativos. En cuanto a las arterias incubadas en DMEM alta glucosa, se mantuvo la respuesta contráctil frente a los agonistas sin observarse cambios estadísticamente significativos. Conclusiones: la metodología es viable ya que las arterias mantienen la contractilidad durante 6 días de incubación en ambos medios. Sin embargo, las diferencias encontradas entre ambas condiciones deberán ser tenidas en cuenta al aplicar este modelo para el estudio del efecto prolongado de sustancias sobre los segmentos arteriales, para el cual este método sería adecuado.