Generación de plantas de tomate dwrky22 y dwrky25/22 mediante CRISPR-Cas9

RAMOS, ROMINA N.; POMBO, MARINA A.; ZHANG, NING; ROSLI, HERNAN G.; MARTIN, GREGORY B.

virtual

Congreso; IV Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina; 2020

Sociedad Argentina de Biología

Las plantas se defienden de patógenos utilizando un sistema inmune de dos fases. La PTI se activa al detectar patrones moleculares asociados a microbios (MAMPs). En particular, tomate detecta dos epitopes de flagelina, uno de ellos flg22, reconocido por el receptor Flagellin sensing 2. Las bacterias virulentas como Pseudomonas syringae pv. tomato (Pst), pueden inyectar proteínas efectoras dentro de la célula. Las plantas resistentes poseen proteínas que reconocen algunos efectores para activar la inmunidad mediada por efectores (ETI). Los tomates Río Grande-PtoR reconocen dos efectores de Pst (AvrPto y AvrPtoB) a través del complejo Pto/Prf. Utilizando datos previos de RNA-seq, se identificaron dos factores de transcripción (FTs) tipo WRKY (22 y 25) cuya expresión se induce cuando la ETI es activada a las 6 h y a los 30 min en plantas infiltradas con flg22. El silenciamiento de los mismos mediante la técnica de silenciamiento inducido por virus en Nicotiana benthamiana produjo un aumento en el recuento de bacterias en plantas desafiadas con P. s. tabaci (AvrPto) y una disminución de depósitos de calosa en la pared celular de plantas tratadas con P. fluorescens 55 (inductor PTI). Utilizando la técnica de CRISPR-Cas9 se generaron 3 líneas de tomate knock out para ambos FTs, dos líneas Δwrky25/22 y una Δwrky22. Mediante retrocruza y genotipado, se obtuvieron generaciones de plantas sin transgen y homocigotas para sus respectivas mutaciones. Las líneas de tomate generadas en este trabajo permitirán profundizar la caracterización de estos reguladores positivos de la inmunidad vegetal.