Generación de plantas de tomate WRKY22 y WRKY25/22 mediante CRISPR-cas9

POMBO, MARINA A.; MARTIN, GREGORY B.; RAMOS, ROMINA N.; ROSLI, HERNAN G.

Congreso; LV reunión anual Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular; 2020

Las plantas se defienden de patógenos utilizando un sistema inmune de dos fases. La PTI se activa al detectar patrones moleculares asociados a microbios (MAMPs). En particular, tomate detecta dos epitopes de flagelina, uno de ellos flg22, reconocido por el receptor flagellin sensing 2. Las bacterias virulentas como Pseudomonas syringae pv. tomate (Pst), pueden inyectar proteínas efectoras dentro de la célula. Las plantas resistentes poseen proteínas que reconocen algunos efectores para activar la inmunidad mediada por efectores (ETI). Los tomates Río Grande-PtoR (RG-PtoR) reconocen dos efectores de Pst (AvrPto y AvrPtoB) a través del complejo Pto / Prf. Utilizando datos previos de RNA-seq, se identificaron en tomate dos factores de transcripción (FTs) tipo WRKY (22 y 25) cuya expresión se induce específicamente cuando la ETI es activada a las 6 h y a los 30´en plantas tratadas con flg22. El silenciamiento de los mismos mediante la técnica de silenciamiento inducido por virus produjo un aumento en el recuento de bacterias en plantas de Nicotiana benthamiana desafiadas con P. s. tabaci (AvrPto) y una disminución de depósitos de calosa en la pared celular de plantas tratadas con P. fluorescens 55. Utilizando la técnica de CRISPR-cas9 se generaron 3 líneas de tomate knock out para ambos FTs, dos líneas Δwrky25/22 y una Δwrky22. Se obtuvieron generaciones de plantas sin transgen y homocigotas para sus respectivas mutaciones. Estos resultados indican que ambos FTs son reguladores positivos de la inmunidad vegetal.