INFIVE   05416
INSTITUTO DE FISIOLOGIA VEGETAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
EFECTO DE LA SOBREEXPRESIÓN DEL CBM DEL GEN DE EXPANSINA 1 (LEEXP1) DE TOMATE SOBRE LA CALIDAD Y EL ABLANDAMIENTO DEL FRUTO.
Autor/es:
PERINI, MAURO A.; SIN, IGNACIO NICOLÁS; MARTINEZ, GUSTAVO ADOLFO; CIVELLO, PEDRO MARCOS
Reunión:
Jornada; 1er Jornada de Jovenes Investigadores; 2015
Resumen:
Uno de los principales factores determinantes de la calidad y vidaposcosecha de un fruto es su firmeza. La misma está condicionada por variosfactores, siendo uno de los principales la rigidez mecánica determinada por lapared celular [1]. Durante la maduración, intervienen numerosas enzimas y proteínas que degradany remodelan la pared celular, y un aspecto común de la estructura de la mayoríade estas proteínas es su organización modular. Incluyen, típicamente, undominio catalítico característico de cada enzima y, uno o más dominios de unióna carbohidratos (CBM), unidos por una cadena poco estructurada. Un CBM sedefine como una secuencia contigua de aminoácidos dentro de una enzima activasobre carbohidratos, que posee un plegamiento característico y la capacidad deunirse al sustrato [2], aunque carece de actividad enzimática. En plantas, se ha informado la presencia de CBMs putativos enendoglucanasas [3,4] y también en expansinas [5]. Estas últimas, son proteínas carentes de actividad hidrolíticaconocida, pero pueden provocar la extensión de paredes celulares aisladas,probablemente por su hipotética capacidad para romper interacciones nocovalentes entre hemicelulosas y celulosa [6]. Asimismo, se ha postulado que suactividad provoca una relajación en la estructura de la pared, facilitando elacceso de otras enzimas a sus sustratos [7]. En tomate, la sobreexpresión de LeExp1 provocó un mayor ablandamientodel fruto, mientras que la supresión del gen retrasó el ablandamiento [8]. De esta manera, surgió la idea de elaborar una estrategia que permitacontrolar la degradación de la pared celular y el ablandamiento de frutos,mediante la sobreexpresión de CBMs en la pared celular, empleando tomate comosistema modelo. Se llevó a cabo el clonado de CBM-LeExp1en tomate (Solanum lycopersicum var. AilsaCraig). Para ello, se hizo uso del sistema Gateway®, usándose como vector deentrada al pDONR221 (Invitrogen). El vector de destino seleccionado fue el pK7WG2D.1. El mismo es un vector binario yse utiliza para generar una sobreexpresión de la proteína de interés con unmarcador visible de selección (GFP). Por transformación vía Agrobacterium tumefaciens y posteriorcultivo in vitro se generaron líneastransformantes (generación F0). Para la caracterización preliminar de losfrutos (plantas F1), secosecharon tomates de líneas transgénicas y controles en el estadío verdemaduro y se realizó un ensayo poscosecha con los mismos. Se evaluó lacoloración externa de los frutos con un colorímetro (Minolta CR300), y la firmeza empleandoun texturómetro (TextureAnalyzer, TA.XTPlus) equipado con una sonda plana de 25 mm de diámetro. En esteúltimo ensayo, se registró la máxima fuerza desarrollada al comprimir el frutohasta provocar una deformación de 0,5mm [8]. Como conclusión preliminar, se puedemencionar que los resultados con los frutos han arrojado datos que muestran unaumento de la firmeza de los frutos sobreexpresantes respecto a los controles.