COMPONENTES CLOROPLÁSTICOS EN UNA NUEVA CLASE DE VACUOLAS ASOCIADAS A LA SENESCENCIA EN HOJAS DE Nicotiana tabacum L.

COSTA, M.L., MARTÍNEZ, D.E., OTEGUI, M.S., GUIAMET, J.J.

Chascomús

Congreso; XXVI Reunión de la Asociación Argentina de Fisiología Vegetal; 2006

Asociación Argentina de Fisiología Vegetal

Un síntoma característico de la senescencia foliar es la degradación de los cloroplastos, sin embargo muy poco se conoce sobre su mecanismo. A través de observaciones por microscopía confocal hemos detectado pequeñas vacuolas ácidas (acumulan rojo neutro y/o Lysotracker Red) asociadas a senescencia (VAS) en hojas de  tabaco.  El objetivo de este trabajo fue determinar si algunos componentes cloroplásticos son degradados en estas vacuolas asociadas a la senescencia. Se trabajó con líneas de tabaco que expresan la proteína fluorescente verde GFP dirigida al cloroplasto (CP-GFP), que se trataron con etefón con el fin de acelerar la senescencia. En las hojas senescentes la proteína CP-GFP se detectó en las vacuolas asociadas a la senescencia, además de en los cloroplastos. Se realizó un fraccionamiento en gradiente discontinuo de sacarosa y se seleccionó la fracción en la que se observó acumulación de rojo neutro como una fracción enriquecida en VAS (F3), lo que se confirmó por microscopía de fluorescencia. Los resultados obtenidos por Western blot indican que la fracción enriquecida en VAS contiene algunos componentes de cloroplastos (Rubisco y CP-GFP). Sin embargo las fracción de VAS carece de D1 (un componentes del centro de reacción del fotosistema 2) indicando que las proteínas cloroplásticas presentes en las VAS no son producto de contaminación de esta fracción por cloroplastos. Las VAS tampoco contienen g-TIP (marcador de vacuola central). El perfil de proteínas de cloroplastos y de la fracción enriquecida en VAS  es diferente, confirmando que se trata de una fracción celular diferente de los cloroplastos, aunque pueda contener algunas proteínas cloroplásticas. La presencia de proteínas cloroplásticas en las VAS indica que estas vacuolas están relacionadas con la degradación de componentes de los cloroplastos durante la senescencia.