Caracterización de plantas de frutilla sobreexpresantes del gen reportero ß-glucuronidasa bajo el control del promotor de Expansina 2

NARDI, C; VILLARREAL NM; MARTÍNEZ GA; CIVELLO, PM

La Plata

Congreso; VII Congreso Iberoamericano de Tecnología Postcosecha y Agroexportaciones. (AITEP 2012); 2012

AITEP

Durante la maduración del fruto de frutilla (Fragaria x ananassa Duch. (cv Camarosa), la acción combinada de diferentes proteínas y enzimas sobre los componentes de la pared celular produce una disminución del contenido, solubilización y depolimerización de los mismos. Esto disminuye la firmeza del fruto, facilitando la acción de patógenos,particularmente en estadios de madurez avanzados. En la pared celular se encuentran las expansinas,  que son proteínas sin actividad  hidrolítica pero que poseen la capacidad de provocar extender paredes celulares aisladas. En frutilla hay descriptas siete expansinas, de las cuales dos (FaEXP2 y FaEXP5) son específicas de fruto y su expresión se incrementa durante la maduración. El estudio de promotores de genes específicos de maduración es de gran relevancia debido a las posibles aplicaciones biotecnológicas de los mismos, ya que un promotor fuerte y específico de fruto puede ser usado para dirigir y favorecer la expresión de transgenes útiles desde un punto de vista nutricional y/o económico. En este trabajo, se aisló un fragmento de 700 pares de bases  (pb)  del promotor de FaEXP2,  con el objeto de llevar a cabo un análisis funcional de esta región regulatoria. Para ello, se clonó el fragmento en el vector binario pKGWFS7. Este vector posee el gen de la β-glucuronidasa (GUS) corriente abajo del sitio de clonado del promotor. Con esta construcción (PromFaEXP2:GUS), se transformaron plantas de frutilla. A su vez, contábamos con plantas de frutilla transformadas con el promotor del virus del mosaico del coliflor, 35SCAMV, fusionado al gen GUS corriente abajo del sitio de clonado del promotor (plantas 35S:GUS), por lo que se realizó una comparación de la expresión de GUS bajo el control de ambos promotores con el propósito de analizar las características del promotor de acuerdo a la expresión obtenida para el gen reportero en diferentes tejidos y  estadios de maduración PromFaEXP2:GUS se expresa altamente en receptáculo a medida que avanza la maduración. En el caso de 35S:GUS, la expresión durante la maduración semantiene aproximadamente constante.  PromFaEXP2:GUS es específico de receptáculo durante la maduración, mientras que  35S:GUS se expresa tanto  en receptáculo como en aquenio. Se concluye que el fragmento de 700 pb del promotor de FaEXP2, es funcional y capaz de dirigir la expresión del gen reportero in vivo.Además, se demostró que dicho fragmento es un promotor fuerte de características similares al promotor constitutivo CAMV35S y  su expresión es principalmente detectada durante la maduración del fruto siendo mayor en el estadio 100%R y siendo su expresión específica de receptáculo. Esto lo convierte en un buen candidato para posibles aplicaciones biotecnológicas relacionadas con la calidad del fruto de frutilla.