Clonado de las regiones promotoras y análisis de la expresión de dos genes de xiloglucano /hidrolasas (XTHs) de frutilla.

VILLARREAL NM; OPAZO C; NARDI, C; MARTÍNEZ GA; MOYA-LEÓN MA; CIVELLO, PM

La Plata

Congreso; VII Congreso Iberoamericano de Tecnología Postcosecha y Agroexportaciones. (AITEP 2012); 2012

AITEP

Las enzimas xiloglucano endotransglicosilasas/hidrolasas (XHTs) están involucradas en el metabolismo de las hemicelulosas que forman parte de pared celular vegetal. El presente trabajo tuvo como objetivo principal contribuir al conocimiento del papel de las XHTs en el metabolismo de hemicelulosas durante la maduración de frutilla (Fragaria x ananassa, Duch).Se clonaron dos genes que codifican XHTs putativas (FaXTH1 y FaXTH2) de frutilla, y dichas secuencias fueron analizadas utilizando diversas herramientas bioinformáticas las cuales permitieron: - detectar secuencias consenso y estructuras secundarias características de XHTs de plantas; - construir un árbol filogenético que ubicó a FaXTH1 y FaXTH2 en diferentes clados. Se realizó un ensayo de inmunodetección (ELISA) que permitió detectar proteínas XHTs durante la maduración (estadios: verde, blanco, 25%, 50% y 100% rojo) de frutos de frutilla pertenecientes al cultivar Camarosa. Mediante la técnica de PCR en Tiempo Real se analizó la expresión de FaXTH1 y FaXTH2 en los estadios de maduración de frutilla mencionados, y se observaron patrones de expresión diferentes. En el caso de FaXTH1 se detectó un nivel de expresión bajo en los estadios verde y blanco, el cual aumentó en los estadios 25% y 50% rojo y luego disminuyó hacia el final de la maduración, mientras que la expresión de FaXTH2 fue similar en todos los estadios de maduración analizados. Tomados en conjuntos, tanto los resultados de los análisis de secuencias como los de expresión, sugieren un rol diferencial de ambos genes en el metabolismo de hemicelulosas durante la maduración de frutilla. Asimismo, se clonaron parte de las regiones promotoras de FaXTH1 y FaXTH2 a partir de ADN genómico de frutilla y se identificaron diferentes elementos regulatorios en las mismas, entre los que se detectaron regiones de respuesta a giberelinas, auxinas, estrés por sequía y luz. A partir del análisis realizado sobre las regiones promotoras de ambos genes, se decidió evaluar el efecto de la aplicación de reguladores del crecimiento vegetal en la expresión de FaXTH1 y FaXTH2. Mediante PCR en Tiempo Real, se observó: - una mayor acumulación de ambos transcriptosen frutos tratados con auxinas y giberelinas con respecto a los controles, -  una menorexpresión de ambos genes en frutos tratados con etileno respecto a los frutos controles, y la situación opuesta en frutos tratados con 1-MCP (un inhibidor de la percepción del etileno).