Splicing alternativo del gen FaPG1 de frutilla

VILLARREAL NM; NARDI, C; MARTÍNEZ GA; CIVELLO, PM

Congreso; XXIX Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2012

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

El objetivo del presente trabajo fue analizar la existencia del fenómeno de splicing alternativo en genes de poligalacturonasa (PG) de frutilla y evaluar la relación de dicho fenómeno con el ablandamiento de los frutos y las diferencias de textura observadas entre distintos cultivares. Para ello, mediante la técnica de 5´ y 3´ RACE se aislaron dos ADNc completos (y parte de sus regiones no traducidas), a partir de frutos de frutilla. Dichos clones, denominados FaPG1 y T-PG presentaron elevada identidad de secuencia con PGs de plantas. La expresión diferencial (medida mediante RT-PCR semicuantitativa) de ambos clones estaría asociada al ablandamiento de frutillas, y a las diferencias de textura observadas entre cultivares. Se determinó que el gen FaPG1 sufre un evento de splicing alternativo (sitio aceptor 3´ alternativo) que conduce a la formación de las variantes FaPG1 y T-PG. La variante FaPG1 codifica una proteína funcional (FaPG1), y tanto la acumulación del mensajero como de la proteína (medida por Western blot) fue mayor, y mas temprana, durante la maduración de un cultivar que produce frutos muy blandos con respecto a un cultivar que produce frutos más firmes. Asimismo, la variante T-PG codificaría una proteína más corta que FaPG1, la cual carecería del sitio catalítico y los sitios de N-glicosilación predichos para PGs de plantas. Esta variante de splicing se acumula en mayor medida durante la maduración de cultivares que producen frutos firmes.Por otra parte, se decidió analizar el intrón II y las regiones flanqueantes del gen FaPG1, de cultivares con firmezas contrastantes. Se detectó variabilidad en la secuencia de nucleótidos del intrón II del gen FaPG1 entre los cultivares analizados. La mayor acumulación de la variante T-PG durante la maduración del cultivar más firme podría ser consecuencia de un mayor contenido de repeticiones AT en el intrón II del gen FaPG1 respecto de los cultivares menos firmes.