Evaluación de la activación de la actividad de la fosfatasa alcalina empleando el complejo dimérico CuNaringenina

JULIANA E. PARENTE; GISELA GADDI; PATRICIA A.M. WILLIAMS; J. CARO-RAMIREZ; EVELINA G. FERRER

La Plata

Jornada; V Jornadas de Química Inorgánica Prof. Aymonino; 2022

Centro de Química Inorgánica-CEQUINOR

EVALUACIÓN DE LA ACTIVACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA FOSFATASAALCALINA EMPLEANDO EL COMPLEJO DIMÉRICO CuNARINGENINAGisela M. Gaddi, Janetsi Y. Caro-Ramírez, Juliana E. Parente, Patricia A.M. Williams, Evelina G.FerrerCEQUINOR (CONICET-UNLP-Asoc.CICPBA) Boulevard 120, e/ 60 y 64, Nº1465, La Plata, BuenosAires, Argentina.Correo electrónico de contacto: giselagaddi@quimica.unlp.edu.arIntroducción: La fosfatasa alcalina (FAL) es un enzima que presenta actividad fosfohidrolasa liberandocomo producto fosfato inorgánico. Esta proteína interviene en numerosos aspectos del metabolismo,como por ejemplo en vías de bioseñalización celular o regeneración ósea.Es un homodímero que presenta en su sitio activo Zn y Mg, el cual contiene 3 uniones metálicas noequivalentes en cada subunidad, dos de ellas ocupadas por iones Zn, uno con actividad catalítica yotro con función estructural. El tercer metal es el catión Mg que también cumple un rol estructural.En diversos trabajos se ha estudiado que la actividad fosfatasa puede ser potenciada administrandometalodrogas. Nuestro grupo de investigación ha sintetizado un complejo metálico binario de Cobreunido al flavonoide Naringenina (CuNar) [1] para evaluar dicho efecto.Metodología: se ha evaluado la actividad fosfatasa de FAL en ausencia y presencia de CuNar encondiciones óptimas para el enzima: temperatura 37 ºC, buffer fosfato, glicina, NaOH a pH 10,4empleando el sustrato p-nitrofenil fosfato (PNPP) que libera p-nitrofenol (PNP) Se puede monitorear la aparición de PNP mediante espectroscopía UV-Visible a 405 nm durante 1hora, obteniéndose de las determinaciones los parámetros cinéticos: velocidad máxima (Vmax), Km yKcat para FAL y FAL-CuNar considerando que la cinética enzimática sigue el modelo de MichaelisMenten.Resultados:De los resultados se desprende que el complejo metálico potencia la actividad fosfatasa de FAL aldoble.Parámetros Cinéticos FAL FAL- CuNarKm (M) 3,00x10-6 3,54x10-6Vmax (M/min) 1,73x10-5 3,86x10-5Kcat (1/min) 2,25 5,01Eficiencia catalítica Kcat/Km (min/M) 7,48x105 1,42x106Referencias1] Tan M, Et al. Bioinorg Chem Appl , 2009, doi:10.1155/2009/347872