Modelo experimental de análisis de manchas para el diagnóstico de infección meníngea

MARCIPAR, IVÁN; GLORIO, ALEJANDRA; LAGIER, CLAUDIA M; MORBIDONI HÉCTOR R

Santa Rosa, La Pampa

Congreso; 10mo Congreso de Química Analítica; 2019

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

La meningitis es una inflamación de las membranas que recubren el cerebro y la médula espinal que, generalmente, tiene origen viral, fúngico o bacteriano. Su diagnóstico es considerado una urgencia por las consecuencias graves que puede originar, evaluándose diversos componentes presentes en líquido cefalorraquídeo (LCR). Los métodos de diagnóstico rápido por imágenes son útiles para detectar la inflamación, pero no bastan para identificar la causa y el tratamiento adecuado. Para distinguir el origen de la enfermedad son necesarios métodos específicos que generalmente conllevan un tiempo intrínseco de análisis que es deseable minimizar. El caso de la meningitis micobacteriana presenta dificultades adicionales por la severidad del patógeno que, a pesar del tratamiento específico, puede causar secuelas importantes en más del 50% de los casos, incluida la muerte. Los métodos hoy más utilizados requieren del cultivo de muestra e identificación del patógeno, lo que implica tiempos prolongados de espera, habiéndose incorporado recientemente la PCR y Xpert MTB/RIF®, que aunque son rápidos y específicos, dan un alto porcentaje de resultados falsamente negativos, son costosos y no están disponibles en la mayorparte de las Instituciones de salud.1 En este trabajo nos propusimos como objetivo desarrollar un método de diagnóstico de presencia micobacteriana, específico, rápido y económico suficiente, como para competir con los métodos actualmente vigentes. Nuestro planteo se basa en la búsqueda del residual de nutrientes, habiendo amplificado su consumo previamente. El analito de elección fue el glicerol, polialcohol nutriente de medios de cultivo, cuyo consumo lo utilizamos como indicativo indirecto de presencia de infección micobacteriana en muestras biológicas. Se utilizaron muestras reales de LCR no infectadas, adicionadas de bacterias no patógenas, emulando así muestras de pacientes con infección meníngea. Éstas se trataron con virus (fagos) que infectan específicamente las bacterias modelo. Se posibilitó tal infección y se inocularon las muestras sobre medios de cultivoconteniendo cantidades conocidas de glicerol y la bacteria modelo. Transcurrido un determinado tiempo de replicación, se dosó por análisis de manchas el glicerol remanente con glicerol kinasa, glicerol fosfato oxidasa y clorofenol, utilizando la aplicación para dispositivos móviles Photometrix.2Se compararon los resultados obtenidos en muestras emuladas positivas, con aquellos obtenidos de las muestras negativas y con el blanco de reactivos, habiéndose evidenciado diferencias en el consumo (o no) de este nutriente. De este modo, logramos integrar el método enzimático desarrollado por nuestro grupo previamente para el análisis de calidad de muestras complejas como biodiesel,3 con el método microbiológico de detección de resistencia antibiótica de micobacterias.41 Boehme CC, Nicol MP, et. al. La ncet. 377 (2011) 1495.2 G.A. Helfer, V.S. Magnus, F. Böck, A. Teichmann, M.F. Ferrao, A.B. Da Costa. J. Braz. Chem. Soc. 28 (2017) 328.3 Glorio A., Berli C., Marcipar I.S. y Lagier C.M. ?Desarrollo de un método para evaluar glicerol con consumo despreciablede reactivos que evita el uso de instrumentación convencional.? 9° Congreso Argentino de Química Analítica, Río cuarto,7 al 10 de Noviembre de 2017.4 McNerney, R. et al. J. Clin. Microbiol. 42, (2004) 2115.