IQUIR   05412
INSTITUTO DE QUIMICA ROSARIO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Reposicionamiento de tres fármacos antiparasitarios para el tratamiento antitumoral. Formulación y Evaluación in Vitro empleando dos líneas celulares de cáncer
Autor/es:
BANGLIONI, MV; LAMAS, M.C.; PRIOTTI J.; LEONARDI, D.; RICO, M.J.; MENACHO-MÁRQUEZ, M.
Lugar:
Buenos Aires Argentina
Reunión:
Jornada; Jornada; XIII Jornadas de Farmacia y Bioquímica Industrial; 2017; 2017
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Farmacia y Bioquímica Industrial (SAFYBI)
Resumen:
Introducción: El reposicionamiento de fármacos implica la utilización de productos farmacéuticos ya aprobados en el tratamiento de ciertas enfermedades que presenten potencial actividad terapéutica frente a otras patologías. Este enfoque es particularmente interesante en la investigación de nuevos fármacos para el tratamiento del cáncer. Explorando la utilidad de un fármaco con blancos moleculares y efectos biológicos conocidos, el riesgo de fallar en alguna de las etapas del desarrollo se reduce drásticamente, y al mismo tiempo, se reducen los costos y tiempos requeridos para que el producto sea aprobado. La polimerización y estructuración de la tubulina es fundamental para la división celular y esta función es blanco de un gran número de compuestos anticancerígenos.Los compuestos benzimidazólicos tales como albendazol (ABZ), mebendazol (MBZ) y ricobendazol (RBZ), empleados en el tratamiento de infecciones parasitarias, son inhibidores de la polimerización de la tubulina, razón por la cual interfieren en la función de los microtúbulos pudiendo causar disrupción de la mitosis y muerte celular. Por lo tanto, esto sugiere que estos fármacos podrían utilizarse como nuevos agentes antitumorales. Los mismos presentan una limitada absorción intestinal debido a su baja solubilidad. En estudios previos demostramos el aumento de la solubilidad de los mismos mediante la formación de complejos de inclusión empleando derivados de β-ciclodextrinas comerciales y obtenidas por síntesis química en nuestro laboratorio. Entre los derivados de β-ciclodextrina, la citrato-β-ciclodextrina permitió un mayor aumento de la solubilidad de los tres fármacos comparada con otros derivados. El objetivo del presente trabajo se basó en estudiar la actividad antitumoral in vitro de los fármacos antiparasitarios, ABZ, MBZ y RBZ, como tales y formando complejos de inclusión empleando citrato-β-ciclodextrina. Además, evaluar combinaciones de estos fármacos con 5-fluorouracilo y doxorrubicina, dos anticancerígenos empleados en la farmacoterapia del cáncer.Materiales y Métodos: Líneas celulares: 4T1, línea celular originalmente aislada de tumores de mama espontáneos, triple negativos, desarrollados en ratones BALB/c; y HCT-116, línea celular de carcinoma colorrectal humano, con una mutación conocida en el codón 12 del oncogén Ras. Los fármacos ABZ, MBZ y RBZ fueron adquiridos en Parafarm, citrato-β-ciclodextrina fue sintetizada en nuestro laboratorio a partir de β-ciclodextrina (Roquette) y ácido cítrico anhidro (Cicarelli). Se utilizó 5-fluorouracilo (Tuteur) y doxorrubicina (Filaxis). Los complejos se prepararon en relación equimolar. Se solubilizó la citrato-β-ciclodextrina en agua bidestilada y los fármacos en solvente orgánico (ABZ y RBZ en ácido acético glacial, y MBZ en ácido fórmico). La solución de fármaco se añadió sobre la solución de ciclodextrina bajo agitación y el complejo formado en solución fue secado por aspersión en un equipo Büchi Mini Spray Dryer B-290. Se realizaron ensayos de proliferación celular para probar la actividad antitumoral de los tres fármacos (ABZ, MBZ y RBZ) y su combinación con anticancerígenos. Para ello, se sembraron 2x103 células/pocillo en placas de 96 pocillos y se cultivaron en medio RPMI 1640, suplementado con suero fetal bovino y antibiótico, a 37°C en una atmósfera de CO2 al 5%. Luego se añadieron las soluciones de fármaco antiparasitario y/o anticancerígeno. Transcurridas 48 h de incubación, se adicionaron 10 μL de WST-1 (sal de tetrazolio) en cada pocillo. Luego de incubar entre 20 y 60 min a 37°C, se procedió a leer la absorbancia en un lector de microplacas a 450 nm, utilizando como referencia la medida de absorbancia a 630 nm. Para la determinación de la concentración inhibitoria del 50% (IC50) de los fármacos y sus complejos con citrato-β-CD, se llevó a cabo el mismo método que para el ensayo de proliferación, usando concentraciones crecientes de los fármacos y de sus complejos (0,01-10 μM). Los valores de IC50 se obtuvieron a partir de las curvas de absorbancia en función del log (concentración de fármaco) en GraphPad Prism.Resultados: Los tres benzimidazoles, solos o formando complejos, presentaron actividad antitumoral en ambas líneas celulares. La disminución del crecimiento celular fue dosis-dependiente. Para el RBZ se requirieron concentraciones diez veces mayores a las de ABZ y MBZ para alcanzar el mismo efecto sobre 4T1. El MBZ mejoró significativamente la actividad antitumoral de la doxorrubicina en la misma línea