Determinación de riboflavina en muestras de orina empleando datos de segundo orden de fluorescencia en modo de adición de patrón y algoritmos quimiométricos

LOZANO, V. A.; PRIVITERA, MARÍA L.

Río Cuarto

Congreso; IX Congreso Argentino de Química Analítica; 2017

AAQA

La riboflavina (vitamina B2) es una de las vitaminas hidrosolubles esenciales para el correcto desempeño de funciones vitales del metabolismo humano. La carencia de riboflavina se debe principalmente a la deficiencia por malnutrición o a la mal absorción de fuentes dietarias ricas en la vitamina. Los métodos analíticos más comúnmente utilizados para evaluar el estado de riboflavina en personas, son los cromatográficos en muestras de orina debido a que el exceso se excreta continuamente en la misma.1 Estos métodos requieren etapas de extracción rigurosas, el uso de grandes cantidades de solventes orgánicos y tiempo de análisis largos.En el presente trabajo se desarrolló un nuevo método de fluorescencia para la cuantificación de riboflavina en muestras complejas como la orina. Éste se llevó a cabo en soluciones acuosas sin pasos previos de limpieza o separación, aprovechando los beneficios de las herramientas quimiométricas.En primer lugar, se estudiaron las variables fisicoquímicas que influyen en la señal de emisión de fluorescencia. También se corroboró que la matriz de orina produce además de interferencia, modificaciones en la respuesta de la riboflavina. Por tales motivos, se realizó una calibración de segundo orden empleando el método de adición de patrón. Se registraron matrices de excitación-emisión de fluorescencia (MEEFs) en las condiciones óptimas de trabajo. Éstas se procesaron con los siguientes algoritmos quimiométricos: análisis paralelo de factores (PARAFAC), cuadrados mínimos parciales desdoblados combinados con bilinealización residual (U-PLS/RBL) y cuadrados mínimos parciales multidimensionales combinados con bilinealización residual (N-PLS/RBL). En el caso del algoritmo PARAFAC, se ensayó tanto en el modo tradicional de adición de patrón (modo 1) como en un modo modificado (modo 2),2 mientras que U-PLS/RBL y N-PLS/RBL se estudiaron sólo en el modo 2. Finalmente, se aplicó el nuevo método para determinar la concentración endógena de riboflavina en 24 muestras de orina provenientes de personas sanas. Las recuperaciones y los indicadores estadísticos fueron satisfactorios para los tres algoritmos estudiados en el modo 2 de adición de patrón. Los límites de detección alcanzados en las muestras de orina son alentadores en comparación con los obtenidos mediante técnicas cromatográficas.Referencias1)A. M. Bishop, C. Fernandez, R. D. Whitehead Jr., P. Morales, D. Boyd Barr, L. C. Wilder, S. E. Baker, J. Chromatogr. B 879 (2011) 1823-1826. 2)V. A. Lozano, G. A. Ibañez, A. C. Olivieri, Anal. Chem. Acta 651 (2009) 165-172.