DISEÑO Y EVALUACIÓN DE NANOPARTÍCULAS DE GLIBENCLAMIDA USANDO DISEÑO EXPERIMENTAL

ARRÚA E; SALOMON C.

Jornada; XIII Jornadas de Farmacia y Bioquímica Industrial ? JorFyBI 2017; 2017

DISEÑO Y EVALUACIÓN DE NANOPARTÍCULAS DE GLIBENCLAMIDA USANDO DISEÑO EXPERIMENTALEva C Arrua, Claudio J SalomonInstituto de Química de Rosario. Área Tecnología Farmacéutica.arrua@iquir-conicet.gov.ar; 341-4370477 (Interno 120)INTRODUCCIÓNLa glibenclamida (GB) es un fármaco con muy baja solubilidad que se ubica en la clase II del Sistema de Clasificación Biofarmacéutico. Una de las alternativas para mejorar su biodisponibilidad es a partir de la disminución del tamaño de partícula, sin embargo, las distintas técnicas y/o excipientes que se emplean a tal fin influyen significativamente en los resultados finales, por lo que el número de pruebas necesarias para un estudio completo es muy grande. En este sentido, el diseño de experimentos en una herramienta estadística que permite determinar las condiciones ideales (u óptimas) para diseñar un producto, proceso o servicio que cumpla con las expectativas usando el mínimo número de experimentos o pruebas. El objetivo de este trabajo fue determinar las condiciones ideales para la elaboración de nanopartículas (NPs) de GB empleando un diseño experimental.MATERIALES Y MÉTODOSMateriales. GB y PEG 6000 fueron suministrados por Droguería Saporiti (Buenos Aires, Argentina). Eudragit RLPO fue donado por Evonik (Buenos Aires, Argentina), poloxameros (P-188 y P-407) fueron donados por BASF (Buenos Aires, Argentina). Los reactivos y solventes empleados fueron de grado analítico.Elaboración de NPs, determinación de la eficiencia de entrampado y del rendimiento. Las NPs fueron preparadas por un proceso de nanoprecipitación y posterior secado en liofilizador. Se disolvió el fármaco en la fase orgánica (etanol: acetona en relación 1:2) conteniendo Eudragit (de 0 a 200 mg totales), y fue incorporado por un sistema de goteo lento sobre una fase acuosa compuesta por los poloxameros (de 0 a 400 mg) y PEG (de 0 a 200 mg) en agua destilada previamente filtrada. La suspensión formada se mantuvo durante 60 minutos en agitación magnética o en ultrahomogeneizador (Ultraturrax), y luego se evaporó el solvente orgánico por agitación magnética (300 rpm) durante toda la noche bajo campana. El sistema fue centrifugado a 15000 rpm. El sobrenadante se empleó para determinar la eficiencia de entrampado del fármaco y el precipitado fue liofilizado para obtener las NPs. El rendimiento fue calculado como la relación entre el peso del producto obtenido experimentalmente y la suma de los pesos de todos los componentes de partida.Determinación del tamaño de partícula. Se realizaron experimentos de dispersión de luz dinámica, utilizando un ?Nano Particle Analyzer SZ-100?.Determinación de la solubilidad acuosa. Aproximadamente 100 mg de cada una de las muestras ensayadas se colocó en frascos con 5 ml de agua destilada. Se mantuvo en agitación orbital a 150 rpm por 72 horas. El contenido de los frascos fue centrifugado para separar las partículas no disueltas de la solución. La cantidad de GB se determinó por absorbancia a 300 nm.Ensayos de disolución. 20 mg de GB (o la cantidad de muestra equivalente) se colocaron en el medio formado por 500 ml de buffer fosfato pH 7,5, se mantuvo en agitación a 50 rpm por el método de paletas a 37 ºC. A tiempos fijos determinados se tomaron alícuotas (por triplicado) que fueron previamente filtradas y la cantidad de GB fue determinada por absorbancia a 230 nm.RESULTADOSLos resultados obtenidos en la fase de screening demostraron que el modelo fue significativo en las 4 respuestas ensayadas. Para la fase de optimización se llevó a cabo un diseño de superficie de respuesta central estudiando todas las respuestas. Se buscó formular un sistema nanoparticulado de GB con un elevado rendimiento, alta eficiencia de entrampado, tamaño de partícula bajo y aumentar al máximo la solubilidad acuosa aparente de GB. El programa muestra los experimentos necesarios para estudiar las combinaciones de los factores seleccionados. Los resultados de los ensayos ANOVA para la optimización de las respuestas arrojan buenos indicadores estadísticos, la falta de ajuste en todos los casos es no significativa, siendo el modelo significativo y el R2 ajustado similar al R2 (tabla I). Con esta información el programa muestra las condiciones ideales para la elaboración de las NPs (la de mayor deseabilidad D=0,83). Los resultados obtenidos experimentalmente fueron similares a los teóricos predichos por el programa (tabla II). Por otro lado se comprobó que velocidad de disolución de GB en este sistema fue superior a la del resto de los sistemas ensayados (Figura 1).CONCLUSIONESEl diseño de experimentos demostró ser una herramienta eficaz para predecir los resultados durante el proceso de elaboración de NPs. También se observó que las respuestas seleccionadas para su optimización mostraron un detallado comportamiento de los sistemas respecto a la disolución de GB, ya que las NPs de GB optimizadas fueron con las que se obtuvieron el mejor perfil de disolución.