Desenvolvimento de método por cromatografía líquida micelar na determinacao de galantamina e seus principais metabólitos em urina de ratos

A. LAMOUNIER, N. MATEUS, A. DA CUNHA, A. LUNA, R. AUCELIO; G. ESCANDAR

Cancún

Congreso; VI Congreso Iberoamericano de Química Analítica y Encuentro Nacional de Química Ambiental; 2016

Os inibidores da acetilcolinesterase se mostram dominantes sobre o tratamento sintomático da doença de Alzheimer. O inibidor reversível, denominado galantamina (GAL), descoberto em 1950, mostra um duplo modo de ação: inibição da AChE e supra-regulação de receptores nicotínicos que aumentam a resposta neurotransmissor acetilcolina1. A administração da GAL conduz à formação de sub-produtos resultantes da bio-transformação oxidativa, tais como O-desmetil galantamina (OD), N-desmetil galantamina (ND), N-óxido galantamina (NOx) e também a epigalantamina (EP), resultado da conversão quiral2. Para a determinação da GAL e seus principais metabólitos foi desenvolvido um método baseado em cromatografia líquida micelar (MLC) com detecção fluorimétrica. Para a separação utilizou-se uma coluna cromatográfica Zorbax 300 Extend C18 e fase móvel constituída de tampão (pH 5,0) contendo 25 mmol L-1 de dodecilsulfato de sódio (SDS)/acetonitrila (97/3% v/v). A detecção fluorimétrica permitiu limites de detecção na ordem de ng g-1, repetibilidade e precisão intermediária entre 2,2 e 4% ao longoda faixa linear. As incertezas combinadas ficaram entre 0,3% (EP) e 11% (ND). Ensaios de recuperação foram satisfatórios (valores entre 91,4 e 114,8%) em amostra de urina fortificada com GAL e metabólitos. A comparação entre métodos (MLC e CLAE com fase reversa) foram feitas com amostras de medicamento cujo princípio ativo era o hidrobrometo de galantamina e, os resultados foram estatisticamente iguais (nível de 95% de confiança). A sensibilidade da curva analítica obtida por MLC foi 2x maior do que a encontrada por CLAE de fase reversa. Análises de urina de ratos coletadas em 2h após a administração do medicamento (aprox. 1mg) foram realizadas por MLC, sendo a GAL e os metabólitos NOx e ND identificados e quantificados na ordem do μg. Adicionalmente, o efeito de amplificação de fluorescência da GAL pelo ambiente organizado, formado por micelas de SDS, em regime de fluxo foi avaliado. Foi comparada a separação cromatográfica por fase reversa com e sem adição pós coluna de solução rica em micelas de SDS após a passagem do analito pela zona cromatográfica. Os resultados apontaram uma amplificação de sinal fluorescente da GAL de 3x quando a detecção ocorreu em meio rico em micelas de SDS, provando que o ambiente micelar é promissor para substâncias que exibem baixa fluorescência. Recuperações obtidas entre 97,5 e 102,2%. Condições cromatográficas: coluna Zorbax Eclipse C18 e fase móvel constituída por tampão (pH 5,0) contendo 2% de propano-2-ol (v/v)/acetonitrila (80/20% v/v). A solução micelar de SDS (100 mmol L-1), misturada à fase móvel pós coluna, foi preparada com a mesma composição da fase móvel.1 Bores, G. M. et al. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, v.277, p.728 ? 738, 1