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Evaluación de dos regiones de la Proteína P35 de Toxoplasmama gondii para el diagnostico de fase aguda de la toxoplasmosis Juan Gabriel Costa1; Pablo Faccendini2, Liliana Carral3; Federico Kaufer3; Claudia Lagier2; Iván Marcipar1. 1 Laboratorio de Tecnología Inmunológica, Facultad de Bioquímica y Cs. Biológicas, Universidad Nacional del Litoral, Santa Fe, Argentina 2 Departamento de Química Analítica, Facultad de Cs. Bioquímicas y Farmacéuticas, Universidad Nacional de Rosario, Rosario, Argentina 3 Laboratorio de Toxoplasmosis del Hospital Alemán, Ciudad Autónoma de Bs. As. Buenos Aires, Argentina e.mail: jcosta@fbcb.unl.edu.ar La toxoplasmosis es una parasitosis que genera complicaciones en individuos inmuno-suprimidos y embarazadas que contraen la infección durante la gestación. Si no se trata adecuadamente, existe el riesgo de transmisión congénita de hasta 40% con graves consecuencias para el feto. Es por lo tanto de suma importancia el diagnóstico certero de la fase aguda de la infección durante el embarazo. Actualmente, si bien existen ensayos serológicos que brindan información sobre el estadio de la infección, suelen obtenerse resultados indefinidos. Una de las estrategias para abordar el diagnóstico es utilizar proteínas del parásito que sean reconocidas por anticuerpos del paciente sólo en la fase aguda. Entre los antígenos más promisorios para este fin se encuentra la proteína P35. Para optimizar el desempeño de dicho antígeno, nos propusimos identificar regiones aminoacídicas que permitieran mejorar la capacidad de discriminación de fases de la infección. Previamente, mediante el modelado de P35 y la predicción de epitopes B lineales y conformacionales, habíamos determinado que los principales determinantes antigénicos se encuentran en la región N terminal. En el presente trabajo, se clonaron, expresaron y evaluaron dos regiones N terminales de P35 correspondientes a las zonas que van desde el aminoácido 1 a 95 y 48 a 145, denominadas P35A y P35B, respectivamente. Se evaluaron sus reactividades mediante ELISA indirecto para IgG específica frente al mismo panel conteniendo sueros de pacientes infectados en etapa aguda (n=26), crónica (n=76) y de individuos no infectados (n=69). Finalmente se comparó el desempeño de ambas proteínas con aquel del lisado del parásito. Mediante curvas ROCs se determinó la capacidad de las proteínas y el lisado para discriminar entre: - sueros de individuos infectados agudos vs no infectados (negativos) o infectados crónicos. - sueros de infectados agudos vs crónicos. - sueros de infectados (crónicos y agudos) vs negativos. En el orden mencionado, las áreas bajo las curvas fueron, para P35A, 0.88, 0.83 y 0.73, para P35B, 0.94, 0.90 y 0.75, mientras que para el lisado resultaron 0.86, 0.75 y 0.93. El resultado obtenido con P35B (0.94) sustenta proponerla como proteína de alto valor para la discriminación entre sueros de pacientes infectados agudos, de crónicos o de individuos no infectados. Además, con P35B se obtuvo una sensibilidad de 100% y una especificidad de 82.5%. En posteriores estudios se ensayará la P35B para la determinación de IgM e IgA, así como para determinar avidez de IgG específicas de las muestras mencionadas.