Homeostasis Acido-Base en Lactococcus Lactis y Enterococcus Faecalis: Respuesta al Estres Acido, Generación de Fuerza Protomotriz y Mecanismos del Metabolismo de Citrato y Malato

MORTERA, P.; REPIZO, G.; MAGNI, C. ; ALARCON, S.

Quilmes

Congreso; XXVIII Congreso Argentino de Química y 4to. Workshop de Química Medicinal; 2010

Asociación Argentina de Química

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} p.MsoBodyTextIndent3, li.MsoBodyTextIndent3, div.MsoBodyTextIndent3 {margin-top:0cm; margin-right:0cm; margin-bottom:6.0pt; margin-left:14.15pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:8.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Las bacterias lácticas constituyen el principal grupo de microrganismos destinados a la producción de alimentos fermentados. El proceso de fermentación involucra la oxidación de un carbohidrato para generar una serie de productos que se acumulan en el exterior celular teniendo un efecto conservante debido a la acidez producida. La caída en el pH del medio externo produce un impacto negativo sobre la viabilidad celular. De esta forma las bacterias lácticas se encuentran sometidas a una fuerte presión de selección determinada por resistencia a las condiciones ácidas. Uno de los mecanismos de resistencia al estrés ácido lo constituyen las reacciones de decarboxilación. En las BALs las decarboxilaciones de ácidos orgánicos (malato o citrato) y aminoácidos generan un consumo de protones contribuyendo a la homeostasis intracelular del pH y así a su supervivencia. En este trabajo se presentan estudios preliminares sobre la homeostasis intracelular del pH en Enterococcus faecalis y Lactococcus lactis asociado al consumo de ácidos carboxílicos. La determinación de pH intracelular y el potencial de membrana, generador de la fuerza protomotriz, se determinaron por estudios cinéticos in vivo de células marcadas con sondas fluorescentes pH-sensible. Las técnicas fueron optimizadas a las condiciones de trabajo de manera de poder determinar el pH intracelular de celulas de E. faecalis y L. lactis, para ello trabajamos con las sondas BCECF [2,7-bis-(2-carboxyethyl)-5(-6)-carboxyfluorescein] y CDCFDA-SE [5-(and -6)-carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein diacetate succinimidyl ester]. En todos los casos se estudió la influencia de diferentes variables experimentales durante el marcado celular. Una vez determinada las condiciones de trabajo se realizaron curvas de calibración fluorescencia-pH para la determinación del pH intracelular de las células microbianas estudiadas. El potencial de membrana se estudio utilizando sonda fluorescente DISC3(5) [3,3’-dipropylthiocarbocyanine iodide]. A partir de todas estas optimizaciones realizadas se abordó el estudio de la homeostasis ácido-base de los cultivos microbianos crecidos en diferentes condiciones de crecimientos (distintos medios, presencia de inductores o represores, mutantes en genes involucrados en las vias metabolicas, etc). Estos análisis se realizaron en función de los estudios asociados al metabolismo de malato, piruvato y citrato por E. faecalis y L. lactis respectivamente, y permite comprender el rol de estos sistemas de decarboxilaciones a la fisiología de estos microorganismos.