ESTUDIOS TENDIENTES AL MEJORAMIENTO DE LA SOLUBILIDAD DEL COMPONENTE MONOOXIGENASA DE UNA BVMO TIPO II

CECCOLI, ROMINA D.; BIANCHI, DARÍO A.; ZOCCHI, SOFÍA B.; RIAL, DANIELA V.

Rosario

Jornada; XV Jornadas de Ciencia, Tecnología e Innovación 2021; 2021

Universidad Nacional de Rosario

Las estrategias biocatalíticas se benefician de la formidable selectividad y la alta eficiencia de las enzimas, a la vez que favorecen el desarrollo de procesos ambientalmente amigables. Esto se debe a que las enzimas, en general, son activas en condiciones suaves de reacción como temperatura y pH moderados. El creciente interés por los procesos sustentables ha impulsado el desarrollo de biocatalizadores para diversas aplicaciones. La síntesis de principios activos de medicamentos, la elaboración de productos naturales, la obtención de una gran variedad de compuestos químicos para la industria y la biorremediación de agua y suelos contaminados son algunas de las aplicaciones más frecuentes. Para satisfacer esta demanda es necesario contar con una amplia variedad de biocatalizadores que permitan el acceso a una gran cantidad de compuestos. Entre las enzimas requeridas se encuentran las que catalizan reacciones de oxidación y reducción. Las Baeyer-Villiger monooxigenasas (BVMOs) catalizan la oxidación de cetonas a ésteres o lactonas. En particular, las BVMOs tipo II son sistemas enzimáticos de 2 componentes formados por una reductasa de FMN dependiente de NADH y una monooxigenasa que requiere FMN reducido para catalizar la oxidación del sustrato. Previamente, nuestro grupo de trabajo identificó, clonó y expresó una posible BVMO tipo II de Mycobacterium tuberculosis, y determinó su habilidad de oxidar (±)‐cis‐biciclo[3.2.0]hept‐2‐en‐6‐ona en sistemas de células enteras. Sin embargo, la expresión recombinante del componente monooxigenasa presentó graves problemas de solubilidad. El objetivo del presente trabajo fue obtener esta monooxigenasa como proteína de fusión para mejorar su solubilidad y facilitar su purificación. Con este fin, hemos clonado su secuencia codificante en 2 vectores y analizado su expresión recombinante en Escherichia coli. Una de las construcciones permite obtener la proteína como fusión a una secuencia de 6 histidinas consecutivas y la otra posibilita la fusión a la proteína de unión a maltosa y a la secuencia de 6 histidinas consecutivas. Además, hemos evaluado si la co-expresión de chaperones moleculares podía favorecer su plegamiento y solubilidad. Aunque la proteína aún se encuentra mayoritariamente en la fracción insoluble, los resultados obtenidos hasta el momento indicarían una leve mejoría en la solubilidad de la enzima.