CEFOBI   05405
CENTRO DE ESTUDIOS FOTOSINTETICOS Y BIOQUIMICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Nuevo tag de afinidad para la purificación de proteínas recombinantes: dominios de unión a almidón.
Autor/es:
WAYLLACE, N. Z.; VALDEZ, H.; DIEGO FABIAN GOMEZ CASATI; BUSI, M. V.
Lugar:
Rosario, Argentina
Reunión:
Congreso; VII Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO- Argentina - II Congreso Internacional de Biotecnología Vegetal.; 2009
Institución organizadora:
REDBIO
Resumen:
<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES-AR; mso-fareast-language:EN-US;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:35.4pt; mso-footer-margin:35.4pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> La enzima almidón sintasa III (starch synthase III, SSIII) de Arabidopsis thaliana contiene en su dominio N-terminal tres regiones repetitivas y cada una de ellas codifica para un dominio de unión a almidón (SBD, starch binding domain) perteneciente a la familia 21 de Módulos de Unión a Carbohidratos (CBM, carbohydrtae binding modules). Los SBDs presentan como ventaja biotecnológica respecto de los CBMs la presencia de dos sitios de unión al polisacárido que les confieren mayor capacidad de unión. De los tres SBDs estudiados (SDB1, SBD2 y SBD3), SBD2 mostró una constante de adsorción a almidón, a amilosa y a amilopectina seis veces mayor que el valor obtenido para SBD1 y SBD3. Por lo tanto, consideramos que SBD2 puede convertirse en un "tag de afinidad" muy eficiente para la purificación de proteínas recombinantes en un sólo paso cromatográfico, en columna o en solución acuosa, a través del uso de resinas de amilosa disponibles comercialmente. Para ello, llevamos a cabo columnas con la resina sepharosa – amilosa y ensayamos la purificación de SBD2 utilizando un gradiente de maltosa. Ensayos preliminares con proteínas mitocondriales de interés para el laboratorio, fusionadas a SBD2, mostraron resultados similares a los obtenidos con un tag de histidinas y resina de níquel.