CEFOBI   05405
CENTRO DE ESTUDIOS FOTOSINTETICOS Y BIOQUIMICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización estructural de la fosfoenolpiruvato carboxilasa de frutos de Citrus sinensis
Autor/es:
PEROTTI, V; FIGUEROA, C; SKEJICH, A; ANDREO, C.S.; IGLESIAS AA; PODESTÁ, F.E.
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; XIII Reunión Latinoamericana y XXVII Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2008
Resumen:
La enzima fosfoenolpiruvato (PEP) carboxilasa (PEPC) cataliza la carboxilación del PEP por el HCO en presencia de Mg , para producir oxaloacetato
y fosfato inorgánico. En frutos cumple funciones anapleróticas proporcionando los esqueletos carbonados para la biosíntesis de aminoácidos, ácidos
grasos y para la asimilación de nitrógeno, aunque también se la implicado en la respuesta a estrés por frío. Estudios previos demostraron la existencia
de una isoforma de PEPC inusualmente grande (600 kDa por cromatografía de exclusión molecular) en sacos de jugo de naranja Valencia. A fin de
caracterizar estructuralmente la misma, se realizaron estudios de electroforesis bidimensional. La primera dimensión consistió en una electroforesis en
condiciones no desnaturalizantes, a partir de la cual se escindió la banda con actividad PEPC. Esta fue sembrada en una segunda dimensión en SDSPAGE
revelada por tinción con azul de Coomasie. Se visualizaron dos bandas: una correspondiente a la subunidad típica de 110 kDa y otra de menor
masa de alta homología (score de 97) con la enzima málica de Arabidopsis (isoforma 2), según estudios de MALDI-TOF. Este resultado sugiere la
existencia de una asociación entre estas dos proteínas que, además, están vinculadas funcionalmente. Con el objeto de evidenciar la posible
interacción, se efectuaron ensayos de inmunoprecipitación, los cuales reforzaron la hipótesis. Finalmente, se clonó la secuencia codificante de PEPC
de frutos de naranja en los vectores de expresión pET19b y pET32a; se efectuaron ensayos de sobreexpresión de la proteína recombinante y se
obtuvieron fracciones enriquecidas mediante cromatografía de afinidad en columnas de Ni2+-Sepharosa. Estos resultados permitirán profundizar la
caracterización estructural de la enzima y realizar los estudios cinéticos y regulatorios correspondientes