PRODUCCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE BIOSURFACTANTES POR ESPECTROMETRÍA DE MASAS Y RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR

DIANA MULLER; MA. ESPERANZA MAINEZ; MARCELO MURGUIA

Rosario

Congreso; III Congreso de Espectrometría de Masas; 2016

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masas

PRODUCCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE BIOSURFACTANTES POR ESPECTROMETRÍA DE MASAS Y RESONANCIA MAGNETICA NUCLEARMaría E. Mainez 1, 2, Diana M. Müller 2 y Marcelo C. Murguía 1, 21Laboratorio de Medio Ambiente INTEC (UNL-CONICET) Santa Fe CP 3000.Argentina. 2 Laboratorio de Química Aplicada. FBCB-UNL. Santa Fe CP 3000. Argentina, email: memainez@intec.unl.edu.ar.Producción - Biosurfactantes- IdentificaciónLos biosurfactantes son compuestos con capacidad activa de superficie producidos por diversos microorganismos (1). Están formados por una región no polar, ácidos grasos de cadena larga y, una región polar, que pueden ser hidratos de carbono, fosfatos y aminoácidos o péptidos cíclicos (2). Se conoce que algunas especies de Pseudomonas son productoras de biosurfactantes, entre ellos, ramnolípidos y lipopéptidos cíclicos (LPC) (3). El interés en el estudio de los mismos radica en que no sólo actúan modificando las propiedades de superficie, sino también contribuyendo con sus aplicaciones en las áreas de la química como también en terapéutica y biomedicina (4).El objetivo de nuestro trabajo fue producir e identificar por Espectrometría de Masas (EM) y Resonancia Magnética Nuclear (RMN) los surfactantes producidos por Pseudomonas sp.Una cepa de Pseudomonas sp. no patógena fue cultivada en un medio enriquecido. La producción fue monitoreada mediante mediciones de la tensión superficial (γ) en los caldos de cultivo. Una vez detectados por EM, fueron aislados del medio de cultivo mediante cromatografía de adsorción. Ésta fue seguida por TLC (empelando reveladores como ácido sulfúrico en etanol al 10% y ninhidrina). Luego las fracciones aisladas de la columna fueron analizadas mediante UPLC-MS. La fracción aislada mayoritaria fue purificada por cristalización (5) y sobre la misma se realizaron estudios por RMN (13C y 1H) con la finalidad de determinar la presencia de grupos funcionales característicos de este tipo de compuestos.Los valores de γ de los caldos dieron alrededor de 31 Dyn/cm (dilución 1/3000). Por EM se determinó que la cepa produjo dos familias de compuestos, ya que en los espectros en ESI (+) se observaron masas de 502 Da, 648 Da, 702 Da y mayores a 1000 Da (1100-1300 Da), en ESI (-) se observo un ion de 1124 m/z. Mediante cromatografía se aislaron una fracción denominada M2 (2%) y otra M3 (38%) con un Rf similar. Ambas fracciones revelaron con ácido sulfúrico pero no con ninhidrina. Por UPLC-MS se pudo resolver y confirmar la presencia de los analitos mayoritarios. Son compuestos cuyo peso molecular (PM) se ubican entre 1200-1800 Da. En los estudios de RMN observamos señales correspondientes a grupos alifáticos y amidas, pero no se observaron señales provenientes de azúcares. Por los resultados obtenidos, se estima que la cepa produjo LPC. Por los PM, se sugiere que los principios activos encontrados podrían formar parte de la familia de Viscosin, los cuales están compuestos por nueve aminoácidos y una cola hidrofóbica de entre diez y catorce átomos de carbono.Se logró producir biosurfactantes a partir de la cepa no patógena de Pseudomonas, con valores de γ muy buenos a excelentes. Los análisis de EM junto con los estudios de RMN permitieron identificar a qué familia pertenecen estos compuestos Es posible que también produzca ramnolípidos pero que no estén en mayor proporción.