Sìntesis de geminis peptídicos activos como agentes de transfección

PEÑA, L.C.; ARGARAÑÁ, F.; DE ZAN, M.M.; GIORELLO, A.; PRIETO, C.; ANTUÑA, S.; VEAUTE,C.; MURGUÍA, M.C.; Y MÜLLER, D.M.

Mar del Plata

Simposio; XX Simposio Nacional de Química Orgánica (SAIQO); 2015

UBA Univ. Nac. de Buenos Aires

La terapia génica consiste en la introducción de un gen funcional ausente en el núcleo celular, el cual al expresarse producirá las proteínas necesarias para corregir una condición patológica específica. Los surfactantes gemini tienen la particularidad de formar micelas en forma reversible con el ADN y debido a sus bajos valores de CMC (concentración micelar crítica) son activos a muy bajas concentraciones. Hemos diseñado mediante la química del 9-fluorenil-metoxicarbonilo (Fmoc) en fase sólida, 4 surfactantes monómeros peptídicos (AG-2-C12-18)) formados por el mismo espaciador (NH2O-W-W-C-O-OCONH2) y diferentes cadenas hidrofóbicas de 12 a 18 carbonos1,2 , los cuales se convierten en presencia de ADN (plásmido pLKV1-EGFP) y mediante oxidación de los residuos de cisteína en los geminis respectivos. Sobre los monómeros se determinó la CMC y velocidad de oxidación en presencia y ausencia de ADN; se controló la formación de los lipoplejos mediante gel de agarosa y el tamaño y potencial ζ de los mismos mediante light scattering. Se estudio la actividad antimicrobiana de los monómeros frente a diferentes bacterias patógenas. Los rendimientos obtenidos en la síntesis fue promedio del 60%, con una pureza mayor al 95 %. Con pesos moleculares entre 901,23 Da (AG-2 C12) y 983,37 Da (AG-2-C18). Todos los monómeros sintetizados se oxidan más rápidamente en presencia de ADN, dentro de las 2 horas de incubación. Las CMC halladas fueron: AG-2- C12: 54,5 uM; AG2-C14: 18.54 uM, AG-2-C16: 64,2 uM y AG-2-C18: 21,6 uM. Mediante gel de agarosa, se determinó que todas las moléculas formaron complejos con el plásmido, ya que el mismo permaneció en el punto de siembra en todos los casos (gel de retardo). Mediante los estudios fisicoquímicos se determin hablar sobre valores encontrados de carga y tamaño. Luego discutir, cuales son los que nos parecen mas aptos para ensayos de actividad de transfección en función de los estudios hechos, y remarcar que solo AG2-C12 fue activo y frente a una sola bacteria (Bacillus subtilis).