Preparación de soportes de quitosano químicamente modificados para la inmovilización covalente de L-arabinosa isomerasa

MANZO, RICARDO M.; DE SOUSA, MARYLANE; MICHLIG CEAGLIO, MELINA P.; FENOGLIO, CECILIA L.; RUBIOLO, AMELIA C.; ROCHA BARRO GONÇALVES, LUCIANA; MAMMARELLA, ENRIQUE J.

La Plata

Encuentro; V Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformaciones (EnReBB); 2012

Conicet La Plata, Sociedad Argentina de Biocatálisis y Biotransformaciones

La obtención de D-tagatosa a partir de D-galactosa por medios biológicos utilizando la enzima L-arabinosa (D-galactosa) isomerasa (EC 5.3.1.4), es un proceso de alto interés tecnológico, particularmente en la industria de productos alimenticios, como endulzante de alimentos especiales [1]. El interés en este cetoazúcar reside en que la D-tagatosa es un azúcar raro que posee numerosos efectos beneficiosos para la salud por tratarse de un endulzante hipocalórico que promueve la pérdida de peso [2], que posee un efecto glucémico nulo y efecto prebiótico reconocido, además de no poseer efectos colaterales indeseados. En la búsqueda de un catalizador conveniente [3] para la producción de este azúcar, se obtuvo un preparado purificado y caracterizado de la enzima L-arabinosa isomerasa proveniente de la cepa Enterococcus faecium DBFIQ E36 aislada de leche cruda bovina. En este trabajo, fueron sintetizados 22 soportes de quitosano, material de bajo costo y con excelentes características fisicoquímicas, en diferentes condiciones experimentales. En primer lugar, a través de la modificación en las etapas previas a la formación de la partícula (reacción con fructosa o alcohol polivinílico, entre otros), luego durante la coagulación (empleando tripolifosfato de sodio o cloruro de polialuminio, entre otros) y, finalmente, modificando las partículas ya formadas (reacción con TNBS o DMF, por ejemplo). Seguidamente, se evalúo el efecto de la inmovilización covalente multipuntual de la enzima L-arabinosa isomerasa a través de la activación de las partículas sintetizadas por dos métodos: con glutaraldehído y con epiclorhidrina. Los mejores resultados, a través del cálculo del rendimiento del proceso de inmovilización en términos de proteína y actividad inmovilizada, han sido obtenidos con el soporte previamente reaccionado con fructosa a 50°C por 4 horas, para el caso de la activación con glutaraldehído y con el soporte coagulado con cloruro de polialuminio, para el caso de la activación con epiclorhidrina.