INTEC   05402
INSTITUTO DE DESARROLLO TECNOLOGICO PARA LA INDUSTRIA QUIMICA
Unidad Ejecutora - UE
artículos
Título:
OPTIMIZACIÓN DE UN ENSAYO DE INMUNOAGLUTINACIÓN PARA DIAGNOSTICAR INFECCIÓN POR TRYPANOSOMA CRUZI
Autor/es:
V.D.G. GONZALEZ; V.S. GARCIA; J.R. VEGA; I.S. MARCIPAR; L.M. GUGLIOTTA
Revista:
Revista Médica de Rosario
Editorial:
CIRCULO MEDICO DE ROSARIO, ROSARIO, SANTA FE , ARGENTINA
Referencias:
Año: 2009 vol. 75 p. 44 - 44
ISSN:
0327-5019
Resumen:
Los látex de inmunodiagnóstico se han utilizado exitosamente para la detección de embarazo, artritis reumatoidea, toxoplasmosis, malaria, brucelosis, leptospirosis, entre otras. La detección de la aglutinación se puede realizar visualmente o mediante métodos instrumentales, como turbidimetría, nefelometría, y dispersión de luz dinámica. Los reactivos de inmunoaglutinación presentan la ventaja de ser rápidos, simples y de bajo costo, resultando además posible su automatización. El desarrollo de un reactivo de diagnóstico basado en la aglutinación de látex se puede dividir en cuatro etapas en las cuales hemos trabajado: I) la síntesis controlada de las partículas de látex; II) la caracterización de los látex producidos, que comprende la determinación de tamaños medios de partículas y su distribución, así como también su caracterización superficial; III) la sensibilización de las partículas de látex con las proteínas antigénicas de interés; y IV) la prueba de los complejos látex-proteínas en ensayos de inmunoaglutinación. Se muestran aquí los resultados obtenidos en la etapa de aplicación de los complejos látex-proteína en ensayos de inmunoaglutinación para diagnosticar la Enfermedad de Chagas. En primer lugar, los ensayos se realizaron empleando látex carboxilados sensibilizados con diferentes proteínas antigénicas del T.cruzi (homogenato del parásito y dos proteínas recombinantes: Ag36 y CP1) y bajo diferentes condiciones de reacción (buffer de alta y baja fuerza iónica, y con agregado de agentes bloqueantes y/o emulsificantes). El seguimiento de la reacción se realizó por espectrofotometría. Se observó que los látex sensibilizados con CP1 mostraron mayor sensibilidad para la detección de anticuerpos anti-T.cruzi a baja fuerza iónica, tanto en presencia de un agente bloqueante como de un emulsificante. Posteriormente se procedió a la evaluación del reactivo, comparativamente con las reacciones serológicas clásicas. Para ello se estudiaron sueros clasificados por ELISA y HAI. Sobre 50 sueros positivos para las dos reacciones serológicas, 48 fueron positivos para la reacción de aglutinación del látex (96%) y 2 negativos (4%). Sobre 50 sueros negativos para las dos reacciones serológicas, 16 fueron positivos (32%) y 34 negativos (68%). Los ensayos muestran la necesidad de aumentar la sensibilidad de la aglutinación con los sueros reactivos, y la influencia negativa de la viscosidad de las muestras no reactivas, por lo que se continúa trabajando de manera de determinar las condiciones de reacción para optimizar el ensayo.