ENSAYO DE INMUNOAGLUTINACIÓN PARA DIAGNOSTICAR INFECCIÓN POR TRYPANOSOMA CRUZI: COMPARACIÓN DE DISTINTAS PROTEÍNAS ANTIGÉNICAS

V.S. GARCIA; V.D.G. GONZALEZ; J.R. VEGA; I.S. MARCIPAR; L.M. GUGLIOTTA

Revista Médica de Rosario

Circulo Medico de Rosario y sus Sociedadeds Filiales

Año: 2011 vol. 77 p. 74 - 74

0327-5019

La Enfermedad de Chagas es una infección parasitaria producida por el T. cruzi y constituye un problema grave de salud pública. Uno de los problemas claves con relación a dicha enfermedad es el diagnóstico. Sin diagnóstico efectivo no se pueden identificar y por ende tratar a los individuos infectados. El criterio recomendado por el Instituto Nacional de Parasitología Dr. Mario Fatala Chaben, la Organización Panamericana de la Salud y la Organización Mundial de la Salud, es que el resultado del inmunodiagnóstico deberá confirmarse con un mínimo de 2 de los métodos inmunológicos utilizados. En la actualidad, las reacciones serológicas más utilizadas son: Hemaglutinación Indirecta (HAI), Inmunoensayo Enzimático (ELISA) e Inmunofluorescencia Indirecta (IFI). Un método de detección alternativo, es el ensayo de inmunoaglutinación (IA), donde se utilizan partículas de látex como soporte para la fijación de antígenos, de manera tal de amplificar la reacción antígeno-anticuerpo que se produce en el inmunoensayo. Se evaluó y comparó el rendimiento antigénico para detectar la Enfermedad de Chagas empleando látex carboxilados sensibilizados con diferentes proteínas antigénicas del T.cruzi (homogenato del parásito y dos proteínas recombinantes: FRA y CP1). Se utilizó un panel de sueros “positivos” para la Enfermedad de Chagas; sueros “positivos” para Lehismaniasis, a fin de evaluar reactividad cruzada, y sueros “negativos” para ambas patologías. Las muestras de suero fueron obtenidas de una región endémica del noreste Argentino y fueron clasificadas como tal en base a los resultados obtenidos con ELISA y HAI. La reacción se detectó midiendo los incrementos en la absorbancia óptica (DA). El DA se determinó restando al correspondiente valor de absorbancia medido, el valor de absorbancia de un blanco (complejo látex-antígeno sin la adición del suero). Los DA obtenidos con cada complejo látex-proteína fueron empleados para la construcción de la curva ROC. A partir de los valores de cut-off obtenidos, se representaron las distribuciones de DA relativas (DA/cut-off). El homogenato del parásito, provee una sensibilidad apropiada pero presentó problemas de especificidad ya que presentó reacción con los sueros Leishmania positivos por tratarse de determinantes antigénicos comunes de los tripanosomátidos. Para las proteínas recombinantes, si bien el complejo formado con la proteína simple (FRA) permitió obtener mejores resultados que con el Homogenato, el número de falsos negativos resultó elevado. Al utilizar los complejos formados con la proteína quimérica (CP1), muchos de los resultados que aparecían como falsos negativos con los complejos formados con FRA desaparecieron. Esto puede estar relacionado al hecho de que al aumentar el número de determinantes antigénicos presentes en la proteína, aumenta la posibilidad de que éstos sean reconocidos por los Ac presentes en el suero, lo que se refleja en una mayor sensibilidad del ensayo. No se observó reacción con los sueros Leishmania positivos cuando se trabajó con las proteínas recombinantes.