Aplicación de técnicas moleculares y spectroscopia FT-IR a la epidemiología de Burkholderia contaminans en infecciones pulmonares de pacientes fibroquisticos

MARTINA, PABLO; BOSCH, ALEJANDRA; MANNINO CONSTANZA; LAGARES, ANTONIO; YANTORNO, OSVALDO

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología, VI Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínica (SADEBAC); 2010

Asociación Argentina de Microbología (AAM)

Especies del Complejo Burkholderia cepacia (CBC) tiene la capacidad para difundir entre la población de pacientes con fibrosis quística (FQ) y de causar graves brotes epidémicos. La aplicación de medidas estrictas para el control de infecciones en hospitales y a la educación de los pacientes, la transmisión de bacterias entre ellos se ha reducido significativamente en los últimos años. Sin embargo, estas medidas de control de la infección no impiden la adquisición de los organismos CBC. Por lo tanto, la correcta identificación y tipificación es esencial para determinar la relación epidemiológica entre aislamientos clínicos y ambientales, y para la aplicación de sistemas eficaces de control de la infección. Entre las 17 especies de bacterias que se han descrito en el CBC, B. contaminans ha sido aislado de cultivos de esputo de los pacientes con FQ, en el Reino Unido, Italia, Portugal, EE.UU., Canadá, Brasil y Argentina, y en muestras ambientales. El objetivo de este estudio fue evaluar el uso de múltiples sistemas de tipificación genómica para la tipificación de B. contaminans en aislados clínicos e industriales. El estudio fue realizado con 75 aislados clínicos de B. contaminans incluyendo un brote del 2004 (12 pertenecientes a pacientes no-FQ) y 10 aislados industriales. La identificación fue hecha por secuenciación del gen recA y comparación con base de secuencias ST del MLST http://pubmlst.org/bcc/. Todos los aislados fueron analizados por técnicas de fingerprintitng (ERIC/Rep/BOX-PCRs). Se empleo espectroscopia FT-IR para analizar células bacterianas enteras, crecidas bajo estrictas condi ciones de cultivo estándar y los espectros se adquirieron sin PHB. La mayor parte de los aislados clínicos no mostraron polimorfismo, siendo el 90% recA ST 71. Aislados pertenecientes a un brote del 2004 agruparon juntos. La mayor parte del resto de los aislados de pacientes No-FQ, industriales y ambiente hospitalario, mostraron diferentes alelos. Box-PCR fingerprinting revelo un relativo elevado nivel de diversidad genotípica, observándose 9 diferentes genotipos (B1-B9). ERIC/REP-PCRs mostraron menor poder de discriminación. Los aislados del brote se distribuyeron en 5 grupos (B1, B3, B4, B6, B8). La diversidad de aislados perteneciente a un mismo paciente también fue evaluado. El análisis por espectroscopia FT-IR, usando la primer derivada del espectro en 3 rangos de IR, mostró ser capaz de distinguir dentro de los aislados clínicos recA ST 71 añadiendo incluso mayores niveles de discriminación que los PCR fingerprinting. Se concluye que tanto PCR fingerprint como espectroscopia FT-IR mostraron excelentes tipeabilidad, pudiendo ser herramientas útiles para estudios epidemiológicos de B. contaminans a nivel mundial. En particular, la espectroscopia FT-IR se puede considerar una metodología sencilla y rápida para la diferenciación de las cepas en grupos de aislamientos obtenidos durante los brotes,o respondiendo a las preguntas de clonalidad entre cepas microbianas.Burkholderia cepacia (CBC) tiene la capacidad para difundir entre la población de pacientes con fibrosis quística (FQ) y de causar graves brotes epidémicos. La aplicación de medidas estrictas para el control de infecciones en hospitales y a la educación de los pacientes, la transmisión de bacterias entre ellos se ha reducido significativamente en los últimos años. Sin embargo, estas medidas de control de la infección no impiden la adquisición de los organismos CBC. Por lo tanto, la correcta identificación y tipificación es esencial para determinar la relación epidemiológica entre aislamientos clínicos y ambientales, y para la aplicación de sistemas eficaces de control de la infección. Entre las 17 especies de bacterias que se han descrito en el CBC, B. contaminans ha sido aislado de cultivos de esputo de los pacientes con FQ, en el Reino Unido, Italia, Portugal, EE.UU., Canadá, Brasil y Argentina, y en muestras ambientales. El objetivo de este estudio fue evaluar el uso de múltiples sistemas de tipificación genómica para la tipificación de B. contaminans en aislados clínicos e industriales. El estudio fue realizado con 75 aislados clínicos de B. contaminans incluyendo un brote del 2004 (12 pertenecientes a pacientes no-FQ) y 10 aislados industriales. La identificación fue hecha por secuenciación del gen recA y comparación con base de secuencias ST del MLST http://pubmlst.org/bcc/. Todos los aislados fueron analizados por técnicas de fingerprintitng (ERIC/Rep/BOX-PCRs). Se empleo espectroscopia FT-IR para analizar células bacterianas enteras, crecidas bajo estrictas condi ciones de cultivo estándar y los espectros se adquirieron sin PHB. La mayor parte de los aislados clínicos no mostraron polimorfismo, siendo el 90% recA ST 71. Aislados pertenecientes a un brote del 2004 agruparon juntos. La mayor parte del resto de los aislados de pacientes No-FQ, industriales y ambiente hospitalario, mostraron diferentes alelos. Box-PCR fingerprinting revelo un relativo elevado nivel de diversidad genotípica, observándose 9 diferentes genotipos (B1-B9). ERIC/REP-PCRs mostraron menor poder de discriminación. Los aislados del brote se distribuyeron en 5 grupos (B1, B3, B4, B6, B8). La diversidad de aislados perteneciente a un mismo paciente también fue evaluado. El análisis por espectroscopia FT-IR, usando la primer derivada del espectro en 3 rangos de IR, mostró ser capaz de distinguir dentro de los aislados clínicos recA ST 71 añadiendo incluso mayores niveles de discriminación que los PCR fingerprinting. Se concluye que tanto PCR fingerprint como espectroscopia FT-IR mostraron excelentes tipeabilidad, pudiendo ser herramientas útiles para estudios epidemiológicos de B. contaminans a nivel mundial. En particular, la espectroscopia FT-IR se puede considerar una metodología sencilla y rápida para la diferenciación de las cepas en grupos de aislamientos obtenidos durante los brotes,o respondiendo a las preguntas de clonalidad entre cepas microbianas.