Avances hacia el desarrollo del primer sistema diagnóstico nacionalmediante doble inmunodifusión en gel de agar para lentivirus de pequeños rumiantes

PICOTTO, LEANDRO DANIEL; CAVALITTO, SEBASTIÁN FERNANDO; FUENTEALBA, NADIA ANALIA; ECHEVERRÍA MARÍA GABRIELA; SGUAZZA, GUILLERMO HERNÁN; PANEI, CARLOS JAVIER

La Plata

Jornada; Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; XII Jornadas de AAIV 2019; 2019

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

Los lentivirus de pequeños rumiantes (SRLV) incluyen al virus de la artritis encefalitis caprina (CAEV) y al virus Visna/Maedi (VMV). Éstos producen enfermedades multisistémicas que pueden derivar en la muerte del animal infectado. Debido a su impacto sanitario, estas enfermedades son de denuncia obligatoria en la Argentina.La prueba de ELISA de IDEXX es el único método aceptado como diagnostico oficial para la detección de anticuerpos contra SRLV en Argentina. Sin embargo, el alto costo de importación hace que sea imposible su uso rutinario. De acuerdo a la OIE, además del ELISA, la técnica de doble inmunodifusión en gel de agar (IDGA) se utiliza como método de detección de anticuerpos contra los SRLV y ha sido empleada en varios países como método oficial de detección.El genoma del CAEV presenta dos cadenas de ARN idénticas que se transcriben a ADN complementario (ADNc), el cual se inserta en el genoma de la célula huésped como provirus. Éstos poseen genes estructurales denominados gag, pol y env. El gen gag codifica para una poliproteína que se cliva en tres proteínas: de cápside (CA), de nucleocápside (NC) y de matriz (MA). Los epítopes inmunodominantes de CA y MA inducen una fuerte respuesta inmunológica, lo que permite la elaboración de equipos de diagnóstico utilizando estas proteínas como antígenos virales. Sin embargo, las variaciones que se producen en estas regiones génicas presentan un inconveniente para la sensibilidad diagnóstica, por lo que el desarrollo de equipos de diagnóstico utilizando las cepas que circulan en cada región o país es de particular interés.En este contexto, el objetivo de este trabajo fue producir la poliproteína Gag del CAEV en Escherichia coli (E. coli) y evaluarla como antígeno para el desarrollo de una técnica de IDGA para la detección de anticuerpos contra SRLV.Una vez purificada, fue evaluada como antígeno viral en placas de Petri conteniendo una solución de Tris 0,05 M, NaCl 8.0% a pH 8 con el agregado de 1 % agar granulado. Se realizaron perforaciones utilizando un sacabocados de siete pocillos donde se sembraron 50 microlitros de cada reactivo. Como controles positivos, se utilizaron sueros caprinos y ovinos previamente analizados por la técnica de ELISA de referencia. Las placas de IDGA fueron incubadas a temperatura ambiente durante 48-72 horas en cámara húmeda y leídas para su interpretación.Se comprobó la aparición de líneas de precipitación entre los sueros controles positivos y el antígeno recombinante. Además, se observó identidad total entre los sueros controles y los sueros de los animales positivos a SRLV detectados, sin visualizarse líneas de precipitación inespecíficas con ninguno de los sueros ensayados.Si bien son necesarios estudios con mayor cantidad de sueros para poder determinar la sensibilidad y la especificidad de la prueba diagnóstica evaluada, los resultados obtenidos sientan una base para poder implementar un sistema de diagnóstico específico y económico que permita incrementar el control serológico en la región, utilizando la técnica de IDGA como screening en programas de erradicación de los SRLV en Argentina.