Estudio de la producción de metabolitos intermediarios durante la degradación de fenantreno en dos cepas de Sphingobium sp.

MACCHI M; FESTA S; IRMA MORELLI; GRANADA MARINA; BIBIANA COPPOTELLI

Santiago de Chile

Congreso; XXIV Congreso Latinoamericano de Microbiología ALAM 2018; 2018

Asociación Latinoamericana de Microbiología

La biodegradación microbiológica de los hidrocarburos policílicos aromáticos (PAH) puede resultar en la acumulación de metabolitos dead-end, posiblemente más tóxicos que la molécula inicial. El cometabolismo, transformación colateral de un cosustrato en presencia obligada de un sustrato, de PAH es crucial en el ambiente. Los objetivos de este trabajo fueron incursionar en el estudio del perfil de intermediarios de degradación de fenantreno en cultivos de cepas puras y estudiar el cometabolismo de pireno en una cepa degradadora de fenantreno.Se comparó, utilizando resting cells, a distintos tiempos durante 48 hs de incubación la acumulación de metabolitos intermediarios de fenantreno en las cepas Sphingobium sp. AM y Sphingobium sp. 20006FA. Las secuencias de sus genomas (Illumina HiSeq1500), se compararon, obteniéndose un diagrama circular con alto porcentaje de identidad de secuencia proteica (RAST-BLASTp) y 99% de similitud (NCBI), aunque presentaron distinta cinética de degradación de fenantreno. Determinado el mayor tiempo de acumulación, se realizaron extracciones químicas (HPLC-UV) que se compararon con un control abiótico a cada tiempo. El cometabolismo del pireno en la cepa Sphingobium sp. AM se estudió mediante resting cells en buffer fosfato Na-K 50 mM suplementado con pireno, incluyendo un control abiótico y un control células en crecimiento. Se realizaron extracciones químicas (GC-FID). Los cromatogramas obtenidos de ambas cepas resultaron diferentes a cada tiempo de incubación. La cepa AM mostró mayor acumulación de intermediarios a las 24 hs mientras que la cepa 20006FA lo hizo a las 46 hs. En los extractos orgánicos de ambas cepas se encontró ácido salicílico. Sin embargo, solamente en la cepa AM se evidenció ácido 1-hidroxi 2-naftoico (AHN). Ya que no se encontraron metabolitos del orto clivaje del AHN se podría suponer que, en este ensayo, ambas cepas degradaron AHN siguiendo la ruta del meta clivaje. Pese a que en cultivos de resting cells de la cepa AM se observó coloración, no se detectó degradación de pireno luego de 12 días de incubación.A pesar de la alta similitud de los genomas, la acumulación de metabolitos intermediarios fue diferente en ambas cepas, lo que podría ser consecuencia de una diferencia en la regulación enzimática.