ANÁLISIS TRANSCRIPTÓMICO SOBRE INTERACCIONES ENTRE CEPAS DEGRADADORAS DE PAH EN UN CULTIVO MIXTO

FESTA, SABRINA; NIETO, ESTEBAN; COPPOTELLI, BIBIANA M.; MORELLI, IRMA S.; MACCHI, MARIANELA

Mar del Plata

Congreso; IV Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2018

El ensamblaje de dos genotipos microbianos puede mostrar dinámicas complejas, que podrían noser observables en cultivos puros, develando funcionalidades y comportamientos de los mismosextrapolables a nivel comunitario.El objetivo de este trabajo es evaluar las interacciones que seestablecen entre dos cepas degradadoras de fenantreno y cómo las mismas afectansudegradación. Se preparó un co-cultivo de dos cepas degradadoras de fenantreno, Sphingobiumsp. AM y Burkholderia sp. Bk, aisladas de un consorcio natural degradador de PAH, en unaproporción 65:35 debido a que en el consorcio natural la abundancia relativa de la cepa AM fuemayor. A partir de este co-cultivo,en medio mineral líquido (MML) con 200 ppm de fenantreno comoúnica fuente de carbono y energía, se determinaronen el tiempo la cinética de degradación delfenantreno y la producción de ácido 1-hidroxi 2-naftoico (AHN) (HPLC-UV) y la estructura del cultivomixto (recuentos en placa R2A) y se analizó la expresión de genes catabólicosde la cepa AM conprimers específicos dirigidos a genes que codifican enzimas dioxigenasasde la vía alta(ahdA1c,ahdA1f, ahdB, ahdC) y baja (ahdA1d, ahdA3, xylE) de degradación de fenantreno (RTqPCR)(2, 8 y 72 hs). Los datos se analizaron mediante el método de ΔΔCt (gen de referencia: genribosomal 16S). Como condición de referencia se utilizó las 2 h de incubación. Ya al día 4 el cultivomixto mostró una degradación del 89%, valor intermedio entre los obtenidos en la cepa AM (75%) yen la cepa Bk (92%) en cultivos puros.Se observó una acumulación de AHN entre los días 2 y 4,mientras que este intermediario ya no se detectó a partir del día 7. Al estudiar la estructura seobservó una mayor proporción de la cepa AM durante los primeros 4 días mientras que a partir deldía 7 esta relación se invirtió manteniéndose hasta el final del ensayo. En el análisis por RT-qPCR,en el cultivo mixto se encontró sub-expresión de los genes adhC a las 8 h de incubación y de losgenes ahdA1f, adhA1d y xylE a las 72 h, con respecto al cultivo puro. Según se desprende de losrecuentos y los ensayos de RT-qPCR, estos resultados estarían indicando que ambas cepas secomplementan en la degradación de fenantreno; la cepa AM lo atacaría inicialmente, pero tendríaun menor protagonismo en la degradación de compuestos intermediarios de la vía baja, dondeintervendría la cepa Bk.