Estudio de la acción de agentes reductores en la producción de enzimas queratinolíticas de Trichophyton ajelloi

CAVELLO, I.; GALARZA, B.; GORTARI, M.C.; HOURS, R.A.; CANTERA, C.

Coronel Suárez, Prov. de Bs. As.

Jornada; III Jornadas de Microbiología Clínica, Industrial y Ambiental de la Provincia de Buenos Aires; 2009

Departamento de Microbiología, Carrera de Microbiología Clínica e Industrial, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNLP.

Estudio de la acción de agentes reductores en la producción de enzimas queratinolíticas de Trichophyton ajelloi Cavello, I1, Galarza B2, Gortari MC1,2, Hours R1, Cantera C2 ( 1: CINDEFI-CONICET; 2: CITEC-CIC) En la actualidad existe una tendencia en aumento a utilizar enzimas en procesos biotecnológicos, constituyendo una alternativa más amigable con el medio ambiente y económicamente más beneficiosa. En especial las queratinasas son enzimas de interés en numerosos procesos industriales, aplicables a la industria textil, alimenticia, degradación de residuos y especialmente en la Industria del Cuero, en el proceso de depilado asistiendo al sulfuro de sodio para minimizar la concentración de sulfuro en el efluente. En el presente estudio se determina el efecto de distintos agentes reductores en la producción de enzimas queratinolíticas de Trichophyton ajelloi.Materiales y métodos: se llevaron a cabo cultivos de Trichophyton ajelloi en medio sólido (MS) y líquido (batch) (ML) utilizando como única fuente de C y N, el “residuo pelo” (RP) proveniente de  un depilado conservador del pelo en Tecnología del Cuero. El medio mineral utilizado estaba compuesto por: buffer fosfato NaH2PO4-K2HPO4, CM (cloranfenicol) 0,5 g/l y cantidades traza de Cl3Fe, Cl2Zn y Cl2Ca, pH 7. El RP fue previamente lavado, secado a 45ºC, molido y autoclavado. Los medios fueron inoculados con 105 ufc/ml. Luego se agregaron distintos agentes reductores en una concentración final de 5 mM en cada sistema: 1) clorhidrato monohidrato de L-cisteína 2) tioglicolato de sodio 3) sulfito de sodio. Ambos medios se incubaron a 28ºC, y en agitación en el caso del líquido. La extracción se realizó cada 3 días en el caso del MS agregando 30 ml de ClNa 0,5 N al contenido de cada placa. En el ML se separó el extracto enzimático del micelio por centrifugación. Ambos fueron filtrados por 45 µm, previo a su análisis. Se determinó el contenido proteico por el método de Bradford (µg/ml) y la actividad azocaseinolítica de los extractos. Se definió la unidad de actividad azocaseinolítica como la cantidad de enzima que genera un aumento de 0,1 unidades de A440nm por minuto y por ml. En los gráficos de concentración proteica vs días de cultivo se puede observar que tanto en medio sólido como líquido los mayores valores se obtienen con el agregado de cisteína. En cuanto a la actividad azocaseinolítica, el tioglicolato produce un pico de actividad en el día 11, que supera 7 veces el producido por el medio mineral no adicionado, para ese mismo día. Conclusiones: el agregado de agentes reductores potencia la producción de enzimas queratinolíticas por intervenir en la reacción de sulfitólisis, aumentando la biodisponibilidad de la queratina. En el caso del tioglicolato, el hongo lo utiliza además como fuente de C mientras que en el caso de la cisteína, como fuente de C y N. Por lo tanto podemos concluir que estos agentes pueden potenciar la producción de estas enzimas, aumentando sus posibilidades de utilización en diversas tecnologías.