Detección de altos niveles de persistores en aislamientos de Burkholderia contaminans provenientes de pacientes con fibrosis quística con infección pulmonar crónica

MARIANA LEGUIZAMÓN; MARISA BETIOL; BELTINA LEÓN; OSVALDO YANTORNO; CLAUDIA PRIETO; JULIANA PALAU; DANIELA CASO; ALEJANDRA BOSCH; PABLO MARTINA; PATRICIA MONTANARO; CECILIA FIGOLI

Rosario

Congreso; XIII Congreso Latinoamericano de Microbiología organizado por la Asociación de Microbiología General (SAMIGe) y la ALAM; 2016

SAMIGE ALAM

Entre las especies del complejo Burkholderia cepacia (CBc), B. contaminans representa la especie de mayor prevalencia en pacientes con fibrosis quística (FQ) en Argentina (1). Aunque para algunos pacientes la infección del tracto respiratorio con B. contaminans es transitoria, su adquisición resulta más típicamente en una infección crónica con una disminución gradual de la función pulmonar (2). Recientemente fue reportado que en B. cenocepacia J2315 (perteneciente al linaje ET12), la región genómica del "Marcador epidémico de cepa Burkholderia cepacia" (BCESM) que se encuentra en la isla genómica BcenGI11 (GI), contiene un operón (BCAM0257-8), que estaría involucrado en la persistencia, la expresión de quórum sensing y la virulencia y su regulador (BCAM0259) (3).El objetivo de este trabajo fue estudiar la posible relación entre la surgimiento de persistores, el establecimiento de la infección crónica por B. contaminans y la presencia de los genes asociados a la isla genómica BcenGI11, los cuales no fueros reportados para esta especie, hasta el momento. Para este propósito, se analizaron 145 aislamientos de B. contaminans recuperados de muestras de esputo de 51 pacientes atendidos en el período de 2004-2015 en 3 centros de referencia FQ en Argentina. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CIM) por microdilución en caldo EUCAST utilizando placas de microtitulación de 96 pocillos (4) empleando ciprofloxacina entre 0,25 a 1024 µg/ ml. La MIC se definió como la concentración más baja para la que no hay diferencia significativa en la DO (λ = 590 nm) entre los pocillos inoculados y el blanco después de 24 hs de incubación. Se cuantificaron las células persistoras recuperadas de cultivos de biofilms de 24 hs expuestos a concentraciones de ciprofloxacina de 2 a 128xMIC por 24 hs. Las regiones genómicas del BCESM y BCAM0257-8-9 fueron amplificadas por PCR y secuenciadas utilizando primers específicos de B. cenocepacia y secuenciados (5). Se compararon las secuencias obtenidas con las secuencias homólogas de la cepa epidémica B. cenocepacia ET12 empleando BLAST.El porcentaje de persistores fue entre 5 y 10% para aislamientos de B. contaminans recuperados de infecciones pulmonares crónicas en contraste con menos del 2% de persistores en aislados obtenidos de infecciones transitorias. Curiosamente, el 100% de los pacientes crónicos infectados (37 pacientes) y el 28,6% de los pacientes con infecciones transitorias (4 de cada 14 pacientes) albergaban tanto las regiones del BCESM y BCAM0257-8-9. El análisis de secuencia mostró que los productos de amplificación de estas regiones tenían una identidad de 93 y 95% con las secuencias de B. cenocepacia J2315, respectivamente. Estos resultados mostraron que la presencia del operón contenida en la región BCESM podría ser responsable del surgimiento de persistores y por lo tanto de las dificultades en las erradicación de la infección crónica por B. contaminans.