de la ruta de degradación de fenantreno de Sphingomonas paucimobilis 20006FA

IBARROLAZA, AGUSTÍN; COPPOTELLI, BIBIANA M.; ALLEGRETTI, PATRICIA; DONATI, EDGARDO R.; MORELLI, IRMA S.

Córdoba, Argentina

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

Asociación Argentina de Microbiología

La biorremediación es una estrategia efectiva para el tratamiento de suelos contaminados con hidrocarburos policíclicos aromáticos (PAH), siendo la degradación microbiológica el proceso predominante que conduce a su eliminación. Es importante que los microorganismos responsables del proceso posean una ruta metabólica completa para evitar la acumulación en el suelo de productos de degradación potencialmente tóxicos. Sin embargo, en general los PAH de alto peso molecular son parcialmente degradados y raramente utilizados como única fuente de carbono y energía por las bacterias. El objetivo de este trabajo fue aislar y caracterizar productos del metabolismo del fenantreno, incursionando en el estudio de las rutas metabólicas de degradación de fenantreno de Sphingomonas paucimobilis 20006FA.  Esta cepa es capaz de degradar fenantreno y ha sido eficazmente probada en ensayos de inoculación de suelos contaminados con PAH. Se realizo un cultivo de S. paucimobilis 20006FA en medio mineral líquido suplementado con fenantreno como única fuente de carbono y energía, se incubo con agitación a 24 °C. Cuando el cultivo llegó a fase estacionaria se realizó una extracción con hexano, seguida de una extracción con acetato de etilo y por ultimo se acidifico la fase acuosa hasta PH 2.5 y se extrajo nuevamente con acetato de etilo. Los extractos se analizaron  mediante HPLC utilizando una columna C-18 en condiciones ácidas. Se determinaron los tiempos de retención y los espectros UV de los picos encontrados y se compararon con estándares en iguales condiciones de trabajo. Los extractos se analizaron mediante HPLC-masa en condiciones alcalinas para determinar los pesos moleculares de los productos de degradación encontrados. La cepa estudiada fue capaz de crecer utilizando fenantreno como única fuente de carbono y energía. Se comprobó que la cepa posee actividad dioxigenasa constitutiva (oxidación del indol a índigo), por lo que la degradación de fenantreno sería iniciada por una dioxigenación. La acumulación de un producto de peso molecular (HPLC-masa) coincidente con el ácido 1-hidroxi-2-naftoico, permitiría deducir el clivaje extradiol del correspondiente diol. Otro metabolito fue identificado como ácido salicílico en base a su peso molecular, su espectro-UV y su tiempo de retención, por lo que la cepa seguiría la degradación a través del meta clivaje. Se determinó la capacidad de la cepa de crecer utilizando salicilato como única fuente de carbono y energía. Los resultados encontrados indicarían la presencia de una ruta de degradación completa, capaz de producir la mineralización del fenantreno, sin embargo se determinó la acumulación de dos productos de degradación.