Expresion de inulinasa ácida producida por Aspergillus kawachii en Pichia pastoris

CHESINI, M; ROJAS, NL; BARUQUE, DJ; CAVALITTO, SF; GHIRINGHELLI, PD

Santa Fe

Simposio; 3º Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos (SAProBio 2014); 2014

La búsqueda de nuevas enzimas capaces de ser empleadas en procesos industriales es una actividad constante en el área de la Biotecnología: una vez detectado el biocatalizador con las propiedades buscadas, éste debe ser purificado para estudiar sus propiedades más relevantes, determinar cuáles son los factores que controlan su eficiencia y finalmente producirlo en cantidades necesarias para la aplicación deseada. La inulina es un polímero de reserva de origen vegetal compuesto principalmente por unidades de fructosa, unidas por enlaces β (2→1) glucosídicos y una glucosa terminal. Las inulinasas son enzimas que hidrolizan la inulina en un solo paso con rendimientos cercanos al 95% de fructosa. Estas enzimas tienen potenciales aplicaciones en la industria de los alimentos para la producción de jarabe de fructosa con alta eficiencia y sin la necesidad de etapas de purificación posteriores, como una alternativa económicamente viable a la obtención de jarabe de maíz de alta fructosa a partir de almidón. La fructosa tiene un poder edulcorante 70% mayor que la sacarosa y no causa problemas en cuanto a cariogenicidad y diabetes. Por otra parte, las inulinasas poseen un enorme potencial para convertir residuos de cosecha de alta inulina en azucares fermentables para producir etanol por medio de sacarificación y fermentación microbiológica simultáneas. El bioetanol obtenido a partir de residuos agroindustriales ricos en inulina posee varias ventajas con respecto al producido desde fuentes tradicionales tales como caña de azúcar, remolacha o maíz: permite utilizar residuos que podrían transformarse en problemas ambientales y no presenta el dilema ético de estar utilizando un alimento para producir energía. in embargo, algunos procesos industriales en los que se emplean enzimas se encuentran limitados por la disponibilidad de masa proteica suficiente para poder llevarlos a cabo. Tal es el caso de las exo-inulinasas fúngicas, que son producidas en muy pequeñas cantidades. Una alternativa viable es el clonado y sobre-expresión en sistemas heterólogos. El objetivo de este trabajo fue llevar a cabo el clonado del gen de una inulinasa de Aspergillus kawachii en el sistema de expresión heterólogo de Pichia pastoris a los efectos de lograr la producción de la misma a escalas adecuadas para su aplicación industrial.