Tecnología limpia en la curtiembre: aplicación de enzimas fúngicas y su evaluación mediante Microscopio Electrónico de Barrido (MEB).

GALARZA B.; GARRO M.L.; GORTARI C.; MARTEGANI, J.; HOURS, R.

La Habana

Congreso; Biotecnología Habana 2014.; 2014

Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de La Habana (CIGB)

El Na2S, usado para el ?depilado destructor del pelo?, genera una alta emisión de SH2, muy tóxico aún a 200 ppm. La utilización de enzimas en la tecnología del cuero durante la etapa ribera en el remojo, depilado/desencalado y purga produce una disminución de hasta el 50% en la generación de este gas. En el ?depilado conservador?, mediante un proceso de inmunización previo con 3% de cal, el pelo puede separarse del efluente como un residuo sólido, disminuyendo los valores de DQO en un 40-60%. En este proceso se pueden utilizar enzimas, reemplazando total o parcialmente al sulfuro, que actúan mediante la reacción de sulfitolisis, donde se rompe el puente disulfuro de la cistina característico de la resistencia de la α-queratina, en la raíz del folículo piloso o la base de la vaina del pelo, seguida por una proteólisis. El uso de enzimas proteolítico-queratinolíticas puede traer consecuencias negativas en el producto final si atacan las fibras de colágeno de la capa flor de la dermis disminuyendo la calidad del cuero, por lo que es necesario aislar proteasas específicas. Se aisló una cepa del dermatofito geofílico Trichophyton ajelloi mediante la técnica del anzuelo que produjo enzimas queratinolíticas cuando creció en un medio mineral mínimo con el residuo pelo bovino como fuente de C y N proveniente de un depilado conservador. Al cabo de 21 días de cultivo produjo un extracto crudo enzimático con actividad específica azocaseinolítica de 3 U/mg y actividad específica queratinolítica de 9,7 U/mg que fue aplicado en los procesos de ribera a escala laboratorio sobre piel bovina fresca. Para el depilado, se incubaron trozos de 3 g de piel bovina fresca durante 48 h, a 37°C, en agitación, con el extracto crudo enzimático liofilizado al 10% p/v de piel, disuelto en buffer Tris-HCl (0,1 M, pH 9), con 0,5% de tensioactivo comercial y 0,2% del biocida 2-tiocianometiltiobenzotiazol. Ensayos previos comprobaron que los anteriores reactivos potenciaban la actividad queratinolítica-azocaseinolítica. Para su observación en MEB (Jeol 6360 LV), el trozo de piel tratado conservado en formol al 10%, fue previamente lavado con H2O destilada durante 24 h, deshidratado en concentraciones crecientes de EtOH (30°-50°-70°-100°), secado por punto crítico de CO2 y metalizado. Se observaron los folículos pilosos vacíos, el colágeno desorganizado y ausencia de epidermis. En las muestras control sin tratamiento, que fueron fijadas en formol 2-4%, 2 h y posfijadas 24 h, el colágeno presentó su distribución característica y se distinguieron los estratos de la epidermis. Se logró obtener un extracto enzimático con ?efecto depilante? para reemplazar al Na2S, y observar su acción en MEB mediante un protocolo específico que resulta de gran utilidad para evaluar morfológicamente la piel bovina durante el curtido.